本試驗(yàn)通過(guò)組織化學(xué)染色和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,研究烏骨山羊黑色素細(xì)胞的分布規(guī)律、形態(tài)以及與黑色素沉積密切相關(guān)基因在烏骨山羊不同組織器官中的表達(dá)含量差異,以探討烏骨山羊?yàn)踬|(zhì)性狀的形成原因,為進(jìn)一步研究烏骨山羊黑色素沉積的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)提供依據(jù),為研究骨山羊黑色素合成相關(guān)基因的分子遺傳機(jī)理提供參考。我們采用免疫組織化學(xué)染色、多巴組織化學(xué)染色和HE染色法對(duì)烏骨山羊組織器官中的黑色素細(xì)胞進(jìn)行染色定位,確定烏骨山羊黑色素細(xì)胞的分布及形態(tài)特點(diǎn)；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)烏骨山羊組織器官中小眼畸形轉(zhuǎn)錄因子（MITF）、黑皮質(zhì)素受體-1（MC1R）、內(nèi)皮素3（EDN3）、酪氨酸酶（TYR）及其家族基因酪氨酸關(guān)聯(lián)蛋白1（TYRP1）和酪氨酸關(guān)聯(lián)蛋白2（TYRP2）基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行測(cè)定。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,黑素細(xì)胞主要分布在烏骨山羊的表皮基底層和毛囊中；其他組織中未見(jiàn)黑色素細(xì)胞的分布。多巴組化染色結(jié)果顯示黑色素細(xì)胞主要分布在黑色被毛毛球部及外根鞘部位并且黑色被毛毛球部及外根鞘部位的黑色素細(xì)胞能合成黑色素顆粒,其他組織中未見(jiàn)黑色素細(xì)胞的分布。HE染色結(jié)果顯示,黑色素細(xì)胞主要分布在烏骨山羊黑色被毛的毛囊外毛根... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞表
1 前言
    1.1 黑色素細(xì)胞與黑色素概述
        1.1.1 黑色素細(xì)胞的起源
        1.1.2 黑色素細(xì)胞的分布
        1.1.3 黑色素細(xì)胞的結(jié)構(gòu)
        1.1.4 黑色素的分泌
    1.2 影響動(dòng)物黑色素形成的相關(guān)基因
    1.3 熒光定量PCR
    1.4 本研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)地點(diǎn)
    2.2 試驗(yàn)動(dòng)物
    2.3 主要藥品和試劑
    2.4 主要儀器設(shè)備
    2.5 主要試劑配制
        2.5.1 免疫組化實(shí)驗(yàn)試劑配制
        2.5.2 多巴組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)試劑配制
        2.5.3 蘇木素-伊紅(HE)染色實(shí)驗(yàn)試劑配制
3 試驗(yàn)方法
    3.1 免疫組織化學(xué)染色方法
        3.1.1 組織固定與蠟塊制作
        3.1.2 制作石蠟切片
        3.1.3 免疫組化染色步驟
    3.2 多巴組織化學(xué)染色方法
        3.2.1 組織固定與蠟塊制作
        3.2.2 制作石蠟切片
        3.2.3 多巴組織化學(xué)(DOPA)染色步驟
    3.3 蘇木素-伊紅(HE)染色方法
        3.3.1 組織固定與蠟塊制作
        3.3.2 制作石蠟切片
        3.3.3 蘇木素-伊紅(HE)染色步驟
    3.4 引物設(shè)計(jì)與合成
    3.5 組織的RNA的提取與檢測(cè)
    3.6 cDNA第一條鏈的合成
    3.7 熒光定量PCR
    3.8 統(tǒng)計(jì)方法與分析軟件
4 結(jié)果與分析
    4.1 免疫組織化學(xué)染色對(duì)黑色素細(xì)胞分布規(guī)律的研究
    4.2 多巴組織化學(xué)染色對(duì)黑色素細(xì)胞分布規(guī)律的研究
    4.3 HE染色對(duì)黑色素細(xì)胞分布特征的研究
    4.4 總RNA的提取與檢測(cè)
    4.5 反轉(zhuǎn)錄結(jié)果
    4.6 MITF在烏骨山羊不同組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
    4.7 MC1R在烏骨山羊不同組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
    4.8 EDN3在烏骨山羊不同組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
    4.9 TYR在烏骨山羊不同組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
    4.10 TYRP1在烏骨山羊不同組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
    4.11 TYRP2在烏骨山羊不同組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
    4.12 烏骨山羊不同被毛顏色皮膚中基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
5 討論
    5.1 黑色素細(xì)胞的標(biāo)記方法與特點(diǎn)
    5.2 烏骨山羊黑色素細(xì)胞的分布規(guī)律與形態(tài)特點(diǎn)
    5.3 TYRP1對(duì)烏骨山羊毛色和膚色的形成作用
6 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]烏骨山羊生活習(xí)性與行為的初步研究[J]. 張騰龍,姜?jiǎng)灼?李先喜,劉桂瓊.  中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué). 2012(03)
[2]內(nèi)皮素受體B在不同毛色羊駝皮膚中的表達(dá)與定位[J]. 耿建軍,穆曉麗,孫樂(lè)天,姜俊兵,張杰,李宏全,張映,董常生.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(11)
[3]羊駝酪氨酸酶基因家族在不同毛色個(gè)體中的基因表達(dá)水平[J]. 高莉,董常生,赫曉燕,賀俊平,耿建軍,范瑞文,朱芷薇,游蓉麗.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(07)
[4]從人外毛根鞘細(xì)胞分離獲取黑素母細(xì)胞[J]. 盧濤,金巖,劉源,雷娟,劉曉亮.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2007(37)
[5]烏骨綿羊和黑色素的研究進(jìn)展[J]. 李文,鄧衛(wèi)東,毛華明.  家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2007(03)
[6]外毛根鞘無(wú)色素性黑素細(xì)胞的免疫組化研究[J]. 譚城,朱文元,魯嚴(yán).  中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志. 2006(02)
[7]MC1R是控制雞黑色素形成的候選主效基因[J]. 楊永升,鄧學(xué)梅,李寧,傅衍,朱睦元,吳常信.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2004(06)
[8]毛囊外根鞘NKI/beteb和HMB-45免疫組化及胰酶消化后細(xì)胞的電鏡觀察[J]. 張汝芝,朱文元,馬慧軍,王大光.  臨床皮膚科雜志. 2003(10)



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