豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一種急性傳染病,PEDV是豬重要的腸道病毒病原之一。本病以引起嘔吐、嚴(yán)重腹瀉和脫水為主要臨床癥狀,對(duì)哺乳仔豬的危害最大,5日齡內(nèi)仔豬感染后的死亡率可達(dá)100%。近年來(lái),PED在全世界范圍內(nèi)頻繁爆發(fā),給我國(guó)和世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究表明,PEDV的變異是導(dǎo)致疫情頻發(fā)的主要原因之一,因此,PEDV越來(lái)越成為當(dāng)前豬病研究的熱點(diǎn)。自2010年以來(lái),本病在陜西省的豬群中發(fā)生率明顯增多。本研究旨在對(duì)從陜西地區(qū)豬場(chǎng)中分離的PEDV進(jìn)行全基因的克隆和序列分析,為豬流行性腹瀉的流行病學(xué)調(diào)查提供一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和研究素材,進(jìn)而為本地區(qū)有效地防控PED提供理論依據(jù)和指導(dǎo)意義。本研究以實(shí)驗(yàn)室保存的陜西某豬場(chǎng)的PEDV分離株命名為PEDV-SX株為研究對(duì)象,將病毒增殖后,首先通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增其S基因,并測(cè)序證實(shí)。序列分析結(jié)果顯示:PEDV-SX株的S基因在堿基44-46位插入了3 nt（TTG）,在堿基57-60位插入了4 ... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CV777株基因組結(jié)構(gòu)示意圖

A:正常 Vero 細(xì)胞 B:感染 PEDV 后的 Vero 細(xì)胞A: NormalVero cells B: Vero cells infected with PEDV圖 2-1 病毒增殖的細(xì)胞病變鏡檢Fig. 2-1 Cytopathic microscopy of viral proliferation in Vero cells鏡檢未接毒 Vero 細(xì)胞與已接毒 Vero 細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)接毒后的細(xì)胞變圓，細(xì)胞之間融合胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡，形成合胞體，此為典型的 CPE（細(xì)胞病變），鏡檢結(jié)果見(jiàn)圖 2-1。2.2.2 PEDV S 基因片段的 RT-PCR 擴(kuò)增采用設(shè)計(jì)的 2 對(duì)引物對(duì) PEDV 陜西分離株進(jìn)行 RT-PCR 擴(kuò)增，均擴(kuò)增出與預(yù)期一致的片段，S1 片段大�。�2880bp；S2 片段大�。�2215bp（見(jiàn)圖 2-2）。

M：Trans 2K plus DNA Marker ；1：S1；2：S2；M: Trans 2K plus DNA Marker; 1: S1; 2: S2; 3: Ne圖 2-2：PEDV S 基因 RT-PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物Fig. 2-2 The RT-PCR amplification products of P重組克隆化到 Trans1-T1 感受態(tài)細(xì)胞后，通過(guò)氨芐青用兩對(duì)鑒定引物對(duì)克隆片段進(jìn)行鑒定，結(jié)果圖 2-3）。


本文編號(hào)：3585208