豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一種急性傳染病,PEDV是豬重要的腸道病毒病原之一。本病以引起嘔吐、嚴重腹瀉和脫水為主要臨床癥狀,對哺乳仔豬的危害最大,5日齡內(nèi)仔豬感染后的死亡率可達100%。近年來,PED在全世界范圍內(nèi)頻繁爆發(fā),給我國和世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。研究表明,PEDV的變異是導致疫情頻發(fā)的主要原因之一,因此,PEDV越來越成為當前豬病研究的熱點。自2010年以來,本病在陜西省的豬群中發(fā)生率明顯增多。本研究旨在對從陜西地區(qū)豬場中分離的PEDV進行全基因的克隆和序列分析,為豬流行性腹瀉的流行病學調查提供一定的實驗數(shù)據(jù)和研究素材,進而為本地區(qū)有效地防控PED提供理論依據(jù)和指導意義。本研究以實驗室保存的陜西某豬場的PEDV分離株命名為PEDV-SX株為研究對象,將病毒增殖后,首先通過RT-PCR擴增其S基因,并測序證實。序列分析結果顯示:PEDV-SX株的S基因在堿基44-46位插入了3 nt（TTG）,在堿基57-60位插入了4 ... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CV777株基因組結構示意圖

A:正常 Vero 細胞 B:感染 PEDV 后的 Vero 細胞A: NormalVero cells B: Vero cells infected with PEDV圖 2-1 病毒增殖的細胞病變鏡檢Fig. 2-1 Cytopathic microscopy of viral proliferation in Vero cells鏡檢未接毒 Vero 細胞與已接毒 Vero 細胞，發(fā)現(xiàn)接毒后的細胞變圓，細胞之間融合胞質內(nèi)出現(xiàn)空泡，形成合胞體，此為典型的 CPE（細胞病變），鏡檢結果見圖 2-1。2.2.2 PEDV S 基因片段的 RT-PCR 擴增采用設計的 2 對引物對 PEDV 陜西分離株進行 RT-PCR 擴增，均擴增出與預期一致的片段，S1 片段大�。�2880bp；S2 片段大�。�2215bp（見圖 2-2）。

M：Trans 2K plus DNA Marker ；1：S1；2：S2；M: Trans 2K plus DNA Marker; 1: S1; 2: S2; 3: Ne圖 2-2：PEDV S 基因 RT-PCR 擴增產(chǎn)物Fig. 2-2 The RT-PCR amplification products of P重組克隆化到 Trans1-T1 感受態(tài)細胞后，通過氨芐青用兩對鑒定引物對克隆片段進行鑒定，結果圖 2-3）。


本文編號：3585208