轉基因動物制備過程中,外源基因的表達水平受到很多因素的影響,其中表觀遺傳修飾是影響外源基因表達效率的一個重要因素。表觀遺傳修飾中,由花斑抑制因子同源物（suppressor of variegation3-9homolog1SUV39H1）基因所催化的組蛋白H3第9位賴氨酸殘基位點的二甲基化和三甲基化（H3K9me2/3）作用尤為突出。本研究對抑制水牛SUV39H1基因表達的shRNA干擾序列進行了篩選,通過抑制穩(wěn)定表達干擾素a-2b（interferon a-2b IFNa-2b）的Bcap-37細胞系中內(nèi)源SUV39H1基因的表達,探討其對外源轉IFNa-2b基因表達效率的影響及其作用機理,為尋找提高轉基因動物中外源基因的表達效率提供新的思路和方法。一、SUV39H1表達載體構建及其shRNA片段的篩選1.克隆水牛SUV39H1基因3’UTR和ORF全長序列,預測水牛SUV39H1基因的miRNA序列,構建表達水牛SUV39H1基因的融合表達載體,并在細胞水平上進行檢測。結果發(fā)現(xiàn),與黃牛相比,水牛SUV39H1基因的ORF和3’UTR序列與其同源性分別為99%和95%；ORF序列比... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英文縮略詞
第一部分 文獻綜述
    第一章 組蛋白甲基化
        1 組蛋白甲基化概述
        2 組蛋白甲基化種類
            2.1 H3K4
            2.2 H3K36
            2.3 H3K27
            2.4 H3K9
            2.5 H3K20
    第二章 SUV39H1基因研究進展
        1 研究歷史
        2 SUV39H1基因的結構與分布
        3 SUV39H1基因的功能及其作用機制
            3.1 SUV39H1基因與異染色質(zhì)的形成
            3.2 SUV39H1與基因的轉錄表達
            3.3 SUV39H1和DNA甲基化的關系
            3.4 SUV39H1與組蛋白乙酰化
第二部分 試驗研究
    第三章 SUV39H1表達載體構建及其shRNA片段的篩選
        第一節(jié) 水牛SUV39H1基因克隆及其融合表達載體構建
            摘要
            1 材料與方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 結果
                2.1 水牛SUV39H1基因ORF克隆與序列分析
                2.2 水牛SUV39H1基因3'UTR序列克隆及分析
                2.3 pEGFP-N1-SUV39H1重組質(zhì)粒酶切鑒定
                2.4 pEGFP-N1-SUV39H1重組質(zhì)粒表達檢測
            3 分析與討論
            4 結論
        第二節(jié) SUV39H1基因在水牛卵泡發(fā)育過程中的表達規(guī)律
            摘要
            1 材料與方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 結果
            3 分析與討論
            4 結論
        第三節(jié) 水牛SUV39H1基因shRNA表達載體構建及篩選
            摘要
            1 材料與方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 結果
                2.1 水牛SUV39H1基因shRNA片段在目的基因靶位點的分析
                2.2 SUV39H1基因shRNA重組質(zhì)粒的酶切驗證
                2.3 SUV39H1基因shRNA抑制效率檢測
                    2.3.1. 熒光觀察檢測
                    2.3.2 qRT-PCR檢測分析
                    2.3.3 Western-blot分析
            3 分析與討論
            4 結論
    第四章 SUV39H1基因shRNA對轉IFNα-2b基因細胞相關基因表達的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 SUV39H1基因shRNA慢病毒包裝及滴度分析
            2.2 SUV39H1基因shRNA病毒感染穩(wěn)定表達IFNα-2b基因Bcap-37細胞系
                2.2.1 定量PCR檢測
                2.2.2 IFNα-2b蛋白的Western-blot分析
        3. 分析與討論
        4 結論
參考文獻
致謝
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本文編號：3579991