本實驗通過分離鑒定馬腺疫鏈球菌新疆株并對馬腺疫鏈球菌新疆株的FNE和FNEB基因的克隆及原核表達，獲得FNE和FNEB截短基因編碼的蛋白，并免疫小鼠分析表達產(chǎn)物的免疫原性。本研究從馬腺疫病馬的膿汁中分離純化得到革蘭氏陽性球菌，經(jīng)生化和PCR鑒定出該菌為馬腺疫鏈球菌，其對小鼠具有致病性。采用特異性引物PCR擴增馬腺疫鏈球菌新疆株FNE基因片段和FNEB基因部分片段，克隆至pMD19-T載體。利用分子生物學軟件分析測序結果，將FNE和FNEB部分基因亞克隆至原核表達載體pET-30a中，轉化大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細胞，以IPTG誘導FNE和FNEB重組蛋白的表達，經(jīng)SDS-PAGE分析在46kD和58kD處出現(xiàn)明顯條帶， Westernblot分析顯示具有反應原性。純化表達的融合蛋白免疫小鼠，以馬腺疫鏈球菌新疆分離株攻毒免疫的小鼠后，F(xiàn)NE免疫組小鼠無保護力而FNEB免疫組小鼠的保護率約為60%，表明FNEB蛋白具有較好的免疫保護性。本研究成功的從新疆伊犁地區(qū)分離出一株馬腺疫鏈球菌新疆株，成功克隆和表達了馬腺疫鏈球菌的FNE和FNEB截短基因，免疫小鼠獲得較好的保護效果，為重組馬... 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

粘附于扁桃體上皮的馬鏈球菌Fig1.1ScanningelectronmicrographshowingbindingofS.equitolingualtonsilepithelium

物致病性實驗性分離株的純培養(yǎng)物制備成懸液，給每只小鼠腹腔注射 0./mL），共 6 只小白鼠，4 只注射肉浸肉湯培養(yǎng)液及作為陰性對照，4小鼠的死亡情況。果原分離菌的革蘭氏染色結果瓊脂平板上可以看到邊緣整齊，中間隆起的灰白色的小菌落，挑取檢（圖 2.1），在視野里面能夠看到被染色成為藍紫色的呈鏈狀的球球菌連在一起，少數(shù)的幾十個連在一起呈長鏈狀。

NAStar 軟件將測序的結果與已報道的其它的馬腺疫鏈PSa 分析蛋白質(zhì)的二級結構；ExPASy 分析 FNEB 蛋測； DNAStar 軟件分析其疏水性、抗原性。EB 基因的 PCR 擴增結果球菌總 DNA 為模板，用特異性引物進行 PCR 擴增，條 1 860 bp 和一條 1 425 bp 的清晰條帶，與預期結果并將回收產(chǎn)物鏈接于 pMD19-T 載體并轉入 DH5α，挑

【參考文獻】：
期刊論文
[1]馬腺疫[J]. 郭紀珂,王曉鈞.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2013(10)
[2]馬腺疫鏈球菌的分離鑒定與疫苗的研制[J]. 康立超,陳新華,鐘發(fā)剛,黃新,韓猛立,何延華.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2013(09)
[3]馬腺疫鏈球菌的分離與鑒定[J]. 陳新華,康立超,黃新,韓猛立,何延華.  中國獸醫(yī)雜志. 2013(01)
[4]鏈球菌屬纖連蛋白結合蛋白的生物信息學分析[J]. 周益裝,尤元海,張建中.  生物信息學. 2011(01)
[5]中西醫(yī)結合治療馬腺疫[J]. 柳志成.  中獸醫(yī)學雜志. 2010(01)
[6]馬鏈球菌獸疫亞種毒力因子[J]. 范紅結,陸承平.  中國人獸共患病學報. 2006(03)
[7]馬腺疫的診治[J]. 潘明興.  貴州畜牧獸醫(yī). 2002(01)
[8]復方千里光注射液治療馬腺疫253例[J]. 吳家驥,程俊生.  中獸醫(yī)學雜志. 1982(04)
[9]馬腺疫治療比較試驗[J]. 唐英岱.  中國畜牧獸醫(yī). 1962(01)

碩士論文
[1]馬鏈球菌獸疫亞種纖連蛋白結合蛋白功能片段的確定及免疫保護試驗[D]. 耿建新.南京農(nóng)業(yè)大學 2007



本文編號：3578893