本實(shí)驗(yàn)通過分離鑒定馬腺疫鏈球菌新疆株并對馬腺疫鏈球菌新疆株的FNE和FNEB基因的克隆及原核表達(dá)，獲得FNE和FNEB截短基因編碼的蛋白，并免疫小鼠分析表達(dá)產(chǎn)物的免疫原性。本研究從馬腺疫病馬的膿汁中分離純化得到革蘭氏陽性球菌，經(jīng)生化和PCR鑒定出該菌為馬腺疫鏈球菌，其對小鼠具有致病性。采用特異性引物PCR擴(kuò)增馬腺疫鏈球菌新疆株FNE基因片段和FNEB基因部分片段，克隆至pMD19-T載體。利用分子生物學(xué)軟件分析測序結(jié)果，將FNE和FNEB部分基因亞克隆至原核表達(dá)載體pET-30a中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，以IPTG誘導(dǎo)FNE和FNEB重組蛋白的表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE分析在46kD和58kD處出現(xiàn)明顯條帶， Westernblot分析顯示具有反應(yīng)原性。純化表達(dá)的融合蛋白免疫小鼠，以馬腺疫鏈球菌新疆分離株攻毒免疫的小鼠后，F(xiàn)NE免疫組小鼠無保護(hù)力而FNEB免疫組小鼠的保護(hù)率約為60%，表明FNEB蛋白具有較好的免疫保護(hù)性。本研究成功的從新疆伊犁地區(qū)分離出一株馬腺疫鏈球菌新疆株，成功克隆和表達(dá)了馬腺疫鏈球菌的FNE和FNEB截短基因，免疫小鼠獲得較好的保護(hù)效果，為重組馬... 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

粘附于扁桃體上皮的馬鏈球菌Fig1.1ScanningelectronmicrographshowingbindingofS.equitolingualtonsilepithelium

物致病性實(shí)驗(yàn)性分離株的純培養(yǎng)物制備成懸液，給每只小鼠腹腔注射 0./mL），共 6 只小白鼠，4 只注射肉浸肉湯培養(yǎng)液及作為陰性對照，4小鼠的死亡情況。果原分離菌的革蘭氏染色結(jié)果瓊脂平板上可以看到邊緣整齊，中間隆起的灰白色的小菌落，挑取檢（圖 2.1），在視野里面能夠看到被染色成為藍(lán)紫色的呈鏈狀的球球菌連在一起，少數(shù)的幾十個連在一起呈長鏈狀。

NAStar 軟件將測序的結(jié)果與已報道的其它的馬腺疫鏈PSa 分析蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)；ExPASy 分析 FNEB 蛋測； DNAStar 軟件分析其疏水性、抗原性。EB 基因的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果球菌總 DNA 為模板，用特異性引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，條 1 860 bp 和一條 1 425 bp 的清晰條帶，與預(yù)期結(jié)果并將回收產(chǎn)物鏈接于 pMD19-T 載體并轉(zhuǎn)入 DH5α，挑

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]馬腺疫的診治[J]. 潘明興.  貴州畜牧獸醫(yī). 2002(01)
[8]復(fù)方千里光注射液治療馬腺疫253例[J]. 吳家驥,程俊生.  中獸醫(yī)學(xué)雜志. 1982(04)
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碩士論文
[1]馬鏈球菌獸疫亞種纖連蛋白結(jié)合蛋白功能片段的確定及免疫保護(hù)試驗(yàn)[D]. 耿建新.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3578893