羊傳染性膿皰病是由羊傳染性膿皰病毒引起的綿羊、山羊等反芻動(dòng)物以及人類的一種急性、高度嗜上皮性、接觸性傳染病。該病在世界養(yǎng)羊業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家和地區(qū)廣泛流行，危害較大，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，目前尚無有效的治療藥物；接種疫苗被認(rèn)為是控制該病可靠而有效的手段。當(dāng)前常規(guī)弱毒苗和滅活苗存在毒力返強(qiáng)、不安全、免疫保護(hù)率不高等缺點(diǎn)，急需開發(fā)一種新型的候選疫苗株以便更好的預(yù)防該病的發(fā)生和流行。羊痘病毒作為載體表達(dá)外源基因的有效性已經(jīng)被大量研究所證實(shí)。因此，本研究選取商品化的山羊痘弱毒疫苗作為載體，構(gòu)建表達(dá)羊傳染性膿皰病毒B2L基因的重組山羊痘病毒，并對(duì)其遺傳穩(wěn)定性、理化特性和免疫原性進(jìn)行檢測(cè)和初步評(píng)價(jià)，旨在獲得能同時(shí)預(yù)防山羊痘和羊傳染性膿皰病的雙價(jià)基因工程疫苗。為此，本研究主要開展以下研究工作：1.分離鑒定羊傳染性膿皰病毒。對(duì)新疆地區(qū)疑似羊傳染性膿皰病的羔羊唇部結(jié)痂進(jìn)行采集，研磨過濾后接種Vero細(xì)胞，分離培養(yǎng)病毒，待出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變時(shí)，收集細(xì)胞進(jìn)行電鏡觀察；通過PCR技術(shù)擴(kuò)增羊傳染性膿皰病毒B2L基因，進(jìn)行測(cè)序分析。同時(shí)對(duì)該分離株和Genbank上公布的中國(guó)其他省市區(qū)的30個(gè)分離株的B2L基因序列進(jìn)行生物信... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增B2L基因M.DL4500Marker；1-3.B2L基因片段；4.陰性對(duì)照

圖 1-3 PCR 擴(kuò)增 B2L 基因M.DL4500 Marker；1-3.B2L 基因片段；4.陰性對(duì)照Fig.1-3 PCR amplification of B2L geneL4500 Marker; 1-2. PCR product of LacZ gene; 3. Negative液 PCR 鑒定產(chǎn)物與 T 載體進(jìn)行連接，挑取 pMD18-T-B2L 的單性引物對(duì)目的基因 B2L 進(jìn)行菌液 PCR 檢測(cè)，經(jīng)增到的條帶與 B2L 目的片段大小一致（見圖 1-4

圖 1-5 pMD18-T-B2L 重組質(zhì)粒的酶切鑒定7000 Marker；1-2. pMD18-T-B2L 的 Sam I 單酶切；3.質(zhì)g.1-5 Identification of plasmid pMD18-T-B2L digested by 00 Marker; 1-2. pMD18-T-B2L digested by Sam I; 3. plas析及進(jìn)化樹構(gòu)建析發(fā)現(xiàn)該 ORFV 分離株 B2L 基因全長(zhǎng) 1137bp該分離株與 Genbank 上公布的中國(guó)其他地區(qū) 3為 96.0%-99.1%，氨基酸的同源性為 88.7%-99離株與 NX/YC-2010 株親緣關(guān)系最近（見圖 1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]牛輪狀病毒VP7基因熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 魏鎖成,鞏轉(zhuǎn)娣,車團(tuán)結(jié),田風(fēng)林.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(02)
[4]進(jìn)口海蘭褐祖代雞禽白血病感染狀態(tài)的持續(xù)觀察及與國(guó)內(nèi)發(fā)病雞群種蛋p27檢出率、病毒分離率的相關(guān)性[J]. 王麗,李傳龍,趙鵬,李德慶,張青嬋,李中明,崔治中.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(01)
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[7]表達(dá)LacZ基因的重組山羊痘病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特征研究[J]. 王芳,劉勝旺,邵昱昊,陳洪巖.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(09)
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[9]山羊痘弱毒疫苗株TK基因的克隆及序列分析[J]. 鞠厚斌,張強(qiáng),袁明,施程洪,韓若嬋,謝芳,吳國(guó)華,顏新敏,李健,朱海霞,朱彩珠,衛(wèi)廣森.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2007(03)
[10]表達(dá)外源綠熒光蛋白重組山羊痘病毒的構(gòu)建及純化[J]. 程小文,胡森,王喜軍,鮑恩東,步志高.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2006(05)

博士論文
[1]口蹄疫病毒基因重組雞痘病毒活載體疫苗系統(tǒng)鑒定研究[D]. 金明蘭.吉林大學(xué) 2007

碩士論文
[1]小反芻獸疫病毒H基因重組山羊痘病毒的構(gòu)建和鑒定[D]. 南文金.揚(yáng)州大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3578623