羊傳染性膿皰病是由羊傳染性膿皰病毒引起的綿羊、山羊等反芻動物以及人類的一種急性、高度嗜上皮性、接觸性傳染病。該病在世界養(yǎng)羊業(yè)發(fā)達的國家和地區(qū)廣泛流行，危害較大，造成嚴重的經(jīng)濟損失，目前尚無有效的治療藥物；接種疫苗被認為是控制該病可靠而有效的手段。當前常規(guī)弱毒苗和滅活苗存在毒力返強、不安全、免疫保護率不高等缺點，急需開發(fā)一種新型的候選疫苗株以便更好的預防該病的發(fā)生和流行。羊痘病毒作為載體表達外源基因的有效性已經(jīng)被大量研究所證實。因此，本研究選取商品化的山羊痘弱毒疫苗作為載體，構(gòu)建表達羊傳染性膿皰病毒B2L基因的重組山羊痘病毒，并對其遺傳穩(wěn)定性、理化特性和免疫原性進行檢測和初步評價，旨在獲得能同時預防山羊痘和羊傳染性膿皰病的雙價基因工程疫苗。為此，本研究主要開展以下研究工作：1.分離鑒定羊傳染性膿皰病毒。對新疆地區(qū)疑似羊傳染性膿皰病的羔羊唇部結(jié)痂進行采集，研磨過濾后接種Vero細胞，分離培養(yǎng)病毒，待出現(xiàn)明顯細胞病變時，收集細胞進行電鏡觀察；通過PCR技術擴增羊傳染性膿皰病毒B2L基因，進行測序分析。同時對該分離株和Genbank上公布的中國其他省市區(qū)的30個分離株的B2L基因序列進行生物信... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PCR擴增B2L基因M.DL4500Marker；1-3.B2L基因片段；4.陰性對照

圖 1-3 PCR 擴增 B2L 基因M.DL4500 Marker；1-3.B2L 基因片段；4.陰性對照Fig.1-3 PCR amplification of B2L geneL4500 Marker; 1-2. PCR product of LacZ gene; 3. Negative液 PCR 鑒定產(chǎn)物與 T 載體進行連接，挑取 pMD18-T-B2L 的單性引物對目的基因 B2L 進行菌液 PCR 檢測，經(jīng)增到的條帶與 B2L 目的片段大小一致（見圖 1-4

圖 1-5 pMD18-T-B2L 重組質(zhì)粒的酶切鑒定7000 Marker；1-2. pMD18-T-B2L 的 Sam I 單酶切；3.質(zhì)g.1-5 Identification of plasmid pMD18-T-B2L digested by 00 Marker; 1-2. pMD18-T-B2L digested by Sam I; 3. plas析及進化樹構(gòu)建析發(fā)現(xiàn)該 ORFV 分離株 B2L 基因全長 1137bp該分離株與 Genbank 上公布的中國其他地區(qū) 3為 96.0%-99.1%，氨基酸的同源性為 88.7%-99離株與 NX/YC-2010 株親緣關系最近（見圖 1

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]豬源凋亡相關基因SYBR Green Ⅰ熒光定量RT-PCR方法的建立[J]. 李玉明,王剛,汪志艷,劉永剛,涂亞斌,王淑杰,姜成剛,王延群,蔡雪輝.  中國預防獸醫(yī)學報. 2013(05)
[3]牛輪狀病毒VP7基因熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[J]. 魏鎖成,鞏轉(zhuǎn)娣,車團結(jié),田風林.  中國預防獸醫(yī)學報. 2013(02)
[4]進口海蘭褐祖代雞禽白血病感染狀態(tài)的持續(xù)觀察及與國內(nèi)發(fā)病雞群種蛋p27檢出率、病毒分離率的相關性[J]. 王麗,李傳龍,趙鵬,李德慶,張青嬋,李中明,崔治中.  中國獸醫(yī)學報. 2013(01)
[5]羊傳染性膿皰病毒趨化因子結(jié)合蛋白（CBP）基因的克隆及表達分析[J]. 王改麗,趙魁,蘭云剛,賀文琦,陸慧君,解勝男,蘇高莉,張冰冰,宋德光,高豐.  中國獸醫(yī)學報. 2011(08)
[6]羊痘病毒載體研究進展[J]. 朱學亮,張強,楊帆,才學鵬.  中國畜牧獸醫(yī). 2009(05)
[7]表達LacZ基因的重組山羊痘病毒的構(gòu)建及其生物學特征研究[J]. 王芳,劉勝旺,邵昱昊,陳洪巖.  中國預防獸醫(yī)學報. 2007(09)
[8]山羊痘病毒疫苗株ORF64—ORF67的分子特征[J]. 王芳,陳洪巖,劉勝旺.  中國預防獸醫(yī)學報. 2007(02)
[9]山羊痘弱毒疫苗株TK基因的克隆及序列分析[J]. 鞠厚斌,張強,袁明,施程洪,韓若嬋,謝芳,吳國華,顏新敏,李健,朱海霞,朱彩珠,衛(wèi)廣森.  中國獸醫(yī)科學. 2007(03)
[10]表達外源綠熒光蛋白重組山羊痘病毒的構(gòu)建及純化[J]. 程小文,胡森,王喜軍,鮑恩東,步志高.  農(nóng)業(yè)生物技術學報. 2006(05)

博士論文
[1]口蹄疫病毒基因重組雞痘病毒活載體疫苗系統(tǒng)鑒定研究[D]. 金明蘭.吉林大學 2007

碩士論文
[1]小反芻獸疫病毒H基因重組山羊痘病毒的構(gòu)建和鑒定[D]. 南文金.揚州大學 2009



本文編號：3578623