microRNA是一類非常小的內(nèi)源性RNA分子,近年來研究發(fā)現(xiàn)正常皮膚發(fā)育需要miRNA參與。microRNA中的Let-7b可通過其靶基因調(diào)控動物毛發(fā)生長。成纖維細(xì)胞生長因子5（FGF5）與動物毛囊周期生長相關(guān)。文獻(xiàn)報道結(jié)合軟件預(yù)測FGF5是let-7b的靶基因之一,但尚未進(jìn)行實驗驗證。本研究利用軟件預(yù)測let-7b與FGF5結(jié)合位點并構(gòu)建FGF5基因3’-UTR段雙熒光素報告載體,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后檢測熒光素酶活性。let-7b真核過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染羊駝成纖維細(xì)胞,檢測轉(zhuǎn)染后基因FGF5及受體fgfrl表達(dá)水平變化,探討microRNA和毛發(fā)生長相關(guān)基因相互作用影響羊駝毛生長的機(jī)制。本實驗研究內(nèi)容和結(jié)果如下：（1）從NCBI核酸庫中查找FGF5基因3’-UTR段的堿基序列,用軟件設(shè)計引物,加入酶切位點連接到pmirGLO載體上。構(gòu)建let-7b的真核表達(dá)載體pcDNA6.2TM-GW/EmGFP,與pmirGLO重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。結(jié)果證明共轉(zhuǎn)染后細(xì)胞組的熒光素酶活性比值是對照組的2.548倍,說明雙熒光素報告載體構(gòu)建成功,并且1et-7b與FGF5為靶向關(guān)系。（2） let-... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染后細(xì)胞焚光素活性比值(*代表P〈0.05)

圖2-2 let-7b轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞形態(tài)觀察Fig， 2-2 The morphology of Transfected fibroblasts2.2 let-7b轉(zhuǎn)染羊駐成纖維細(xì)胞的效率

(3)基因FGF5和fgfrl定量結(jié)果分別用let-7b真核過表達(dá)載體，空質(zhì)粒載體（Negtive Control)轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，進(jìn)行基因FGF5和fgfrl表達(dá)水平變化的檢測。結(jié)果見表2-7A和B和圖2-8A和B。表2-7A FGF5基因在不同組中勞光定量結(jié)果Table2-7A Real-time PGR results of FGF5 gene in different groups基因 ^ 差異倍數(shù)Gene Gmop ACT AACT Fold difference轉(zhuǎn)染 let-7b 組 18.626±0.041 1.914±0.041 0.287FGF5 轉(zhuǎn)染 NC 組 17.557±0.092 0.846±0.092 0.557 細(xì)胞組 16. 631 ±0.082 -0. 080±0.082 1-33 -

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]FGF5在青年羊駝背部和耳部皮膚中的表達(dá)和定位[J]. 劉丹丹,張志宇,赫曉燕,董彥君,朱芷葳,白瑞,張杰,郝歡慶,邢海權(quán).  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2011(05)
[2]青年羊駝耳部和背部皮膚組織中miRNA差異表達(dá)研究[J]. 赫曉燕,郝歡慶,劉丹丹,范瑞文,曹靖,朱芷葳,董彥君,邢海權(quán).  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2010(11)
[3]內(nèi)皮素受體B在不同毛色羊駝皮膚中的表達(dá)與定位[J]. 耿建軍,穆曉麗,孫樂天,姜俊兵,張杰,李宏全,張映,董常生.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2010(11)
[4]Detection of let-7a microRNA by real-time PCR in gastric carcinoma[J]. Hong-He Zhang,Xian-Jun Wang,Guo-Xiong Li,Diagnostic Laboratory,Hangzhou First People’s Hospital,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China En Yang,Ning-Min Yang,Zhiyuan Medical Laboratory,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[5]毛囊形態(tài)發(fā)生的分子機(jī)制[J]. 李國強(qiáng),紀(jì)影暢,李宇.  國外醫(yī)學(xué)(皮膚性病學(xué)分冊). 2004(01)



本文編號：3578482