microRNA是一類(lèi)非常小的內(nèi)源性RNA分子,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)正常皮膚發(fā)育需要miRNA參與。microRNA中的Let-7b可通過(guò)其靶基因調(diào)控動(dòng)物毛發(fā)生長(zhǎng)。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子5（FGF5）與動(dòng)物毛囊周期生長(zhǎng)相關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)合軟件預(yù)測(cè)FGF5是let-7b的靶基因之一,但尚未進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本研究利用軟件預(yù)測(cè)let-7b與FGF5結(jié)合位點(diǎn)并構(gòu)建FGF5基因3’-UTR段雙熒光素報(bào)告載體,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后檢測(cè)熒光素酶活性。let-7b真核過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染羊駝成纖維細(xì)胞,檢測(cè)轉(zhuǎn)染后基因FGF5及受體fgfrl表達(dá)水平變化,探討microRNA和毛發(fā)生長(zhǎng)相關(guān)基因相互作用影響羊駝毛生長(zhǎng)的機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：（1）從NCBI核酸庫(kù)中查找FGF5基因3’-UTR段的堿基序列,用軟件設(shè)計(jì)引物,加入酶切位點(diǎn)連接到pmirGLO載體上。構(gòu)建let-7b的真核表達(dá)載體pcDNA6.2TM-GW/EmGFP,與pmirGLO重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。結(jié)果證明共轉(zhuǎn)染后細(xì)胞組的熒光素酶活性比值是對(duì)照組的2.548倍,說(shuō)明雙熒光素報(bào)告載體構(gòu)建成功,并且1et-7b與FGF5為靶向關(guān)系。（2） let-... 

【文章來(lái)源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染后細(xì)胞焚光素活性比值(*代表P〈0.05)

圖2-2 let-7b轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞形態(tài)觀察Fig， 2-2 The morphology of Transfected fibroblasts2.2 let-7b轉(zhuǎn)染羊駐成纖維細(xì)胞的效率

(3)基因FGF5和fgfrl定量結(jié)果分別用let-7b真核過(guò)表達(dá)載體，空質(zhì)粒載體（Negtive Control)轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，進(jìn)行基因FGF5和fgfrl表達(dá)水平變化的檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表2-7A和B和圖2-8A和B。表2-7A FGF5基因在不同組中勞光定量結(jié)果Table2-7A Real-time PGR results of FGF5 gene in different groups基因 ^ 差異倍數(shù)Gene Gmop ACT AACT Fold difference轉(zhuǎn)染 let-7b 組 18.626±0.041 1.914±0.041 0.287FGF5 轉(zhuǎn)染 NC 組 17.557±0.092 0.846±0.092 0.557 細(xì)胞組 16. 631 ±0.082 -0. 080±0.082 1-33 -

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]內(nèi)皮素受體B在不同毛色羊駝皮膚中的表達(dá)與定位[J]. 耿建軍,穆曉麗,孫樂(lè)天,姜俊兵,張杰,李宏全,張映,董常生.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(11)
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[5]毛囊形態(tài)發(fā)生的分子機(jī)制[J]. 李國(guó)強(qiáng),紀(jì)影暢,李宇.  國(guó)外醫(yī)學(xué)(皮膚性病學(xué)分冊(cè)). 2004(01)



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