為研制新型、可用于區(qū)分野毒感染、助力豬瘟凈化的亞單位疫苗,本研究參考了近年來國內(nèi)豬瘟病毒（CSFV）流行株的E2基因序列,并根據(jù)昆蟲細(xì)胞密碼子偏嗜性對其進(jìn)行優(yōu)化、合成后,克隆至轉(zhuǎn)移載體中,構(gòu)建了重組質(zhì)粒,隨后轉(zhuǎn)化至含有穿梭質(zhì)粒的大腸桿菌DH10Bac,制備了重組桿粒并轉(zhuǎn)染至SF9細(xì)胞,獲得了表達(dá)E2基因的重組桿狀病毒。間接免疫熒光試驗(yàn)和western blot檢測結(jié)果顯示該桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞后可正確表達(dá)E2蛋白（Bac-E2）。將Bac-E2（50μg/頭份）與豬瘟兔化弱毒疫苗[HCLV,7500半數(shù)兔體感染劑量（RID50）/頭份]分別免疫豬瘟抗體陰性仔豬,3周后用相同的劑量加強(qiáng)免疫。首免后5周Bac-E2組豬CSFV中和抗體均不低于11 024,顯著高于HCLV組（p<0.01）;首免后35 d,利用105.0MLD（最小致死劑量）的CSFV石門強(qiáng)毒經(jīng)耳后頸部肌肉注射攻毒后,Bac-E2和HCLV組豬的保護(hù)率均為100%,陰性對照組豬全部發(fā)病、死亡;采用熒光定量PCR檢測各組豬口腔和肛門拭子中CSFV的排毒情況,結(jié)果顯示Bac-E2和HCLV組豬攻毒后0～16 d的咽拭子及... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2020,42(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

重組桿狀病毒的PCR鑒定

將P5代重組桿狀病毒以10倍倍比稀釋后接種SF9細(xì)胞，7 d后進(jìn)行IFA鑒定。結(jié)果顯示，感染病毒的細(xì)胞可觀察到特異的綠色熒光，而陰性對照則未出現(xiàn)熒光（圖2），表明獲得了重組桿狀病毒，且桿狀病毒中的CSFV E2基因能夠在昆蟲細(xì)胞中獲得正確表達(dá)。根據(jù)Reed-Muench方法計算重組桿狀病毒滴度為107.8TCID50/mL。2.3 重組桿狀病毒的western blot鑒定結(jié)果

將P5代Rb-E2接種生長良好的High Five懸浮細(xì)胞，收獲的上清液經(jīng)western blot鑒定。結(jié)果顯示，經(jīng)桿狀病毒感染60 h的細(xì)胞即可出現(xiàn)大小為52 ku的目的蛋白條帶；接種桿狀病毒后96 h，上清液中Bac-E2含量最高（圖3），經(jīng)SDS-PAGE電泳后采用灰光度值法測定蛋白濃度可達(dá)50μg/m L，表明獲得了能夠表達(dá)CSFV E2蛋白的重組桿狀病毒Rb-E2，表達(dá)的Bac-E2主要存在于細(xì)胞上清液中，且具有良好的反應(yīng)原性。2.4 Bac-E2的免疫效力評價

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]豬瘟病毒C株重組標(biāo)記疫苗候選株免疫原性與鑒別檢測[D]. 廖迅.浙江大學(xué) 2016



本文編號：3577200