本實(shí)驗(yàn)以廣西水牛睪丸作為研究材料。通過分析比較多個(gè)不同物種睪丸間質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)方法,首次體外成功培養(yǎng)出水牛睪丸間質(zhì)細(xì)胞,并對(duì)其進(jìn)行冷凍保存等相關(guān)研究,然后通過質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定出該細(xì)胞內(nèi)總蛋白的種類,本研究主要分為四個(gè)試驗(yàn)。試驗(yàn)一：初步建立水牛睪丸間質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)體系。通過綜合參考不同物種睪丸間質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法,對(duì)培養(yǎng)皿的選擇、膠原酶的消化時(shí)間長(zhǎng)短、Percoll的使用方法等一一對(duì)比。結(jié)果發(fā)現(xiàn),選擇CORNING公司的培養(yǎng)皿,膠原酶Ⅳ消化30-40min, Percoll配置成1.090、1.080、1.065、1.045四個(gè)梯度,并在培養(yǎng)6h之后更換細(xì)胞培養(yǎng)液,能夠得到最大純度的水牛睪丸間質(zhì)細(xì)胞。試驗(yàn)二：對(duì)試驗(yàn)一中生長(zhǎng)狀態(tài)良好的水牛睪丸間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行凍融操作。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①生長(zhǎng)天數(shù)小于3d時(shí),用0.25%胰蛋白酶與4倍體積的PBS相結(jié)合,需要消化3min左右。生長(zhǎng)天數(shù)大于7d時(shí),消化時(shí)間需延長(zhǎng)至30-40min。②與原代培養(yǎng)的睪丸間質(zhì)細(xì)胞相比,傳代之后,細(xì)胞的生殖及增殖能力明顯下降。③間質(zhì)細(xì)胞冷凍保護(hù)劑配方為：70%DMEM/F12培養(yǎng)液（無血清）+20%FBS（胎牛血清）+10%DMS... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

促性腺激素的調(diào)節(jié)作用示意圖

圖1-1 Percoll密度梯度離心Figure. 1-1 The density gradient centrifiigation of percoll率檢測(cè)

細(xì)胞活率鑒定Figure.1-2Theidentificationoflivecell

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[5]紅景天苷對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞和吊尾應(yīng)激小鼠睪酮分泌的影響及藥動(dòng)學(xué)研究[D]. 劉曉暉.河北醫(yī)科大學(xué) 2009



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