發(fā)布時(shí)間：2022-01-08 15:24

　　為尋找牛卵泡顆粒細(xì)胞（GCs）凋亡的關(guān)鍵調(diào)控因子,闡明單胎動(dòng)物卵泡閉鎖調(diào)控機(jī)理,本研究對(duì)奶牛優(yōu)勢(shì)卵泡與從屬卵泡GCs深度測(cè)序,篩選卵泡發(fā)育相關(guān)的下調(diào)基因。選取健康荷斯坦奶牛,屠宰后,分別采集卵巢上正常發(fā)育的最大卵泡（8～10 mm）與第二大卵泡（5～8mm）,并結(jié)合雌激素/孕激素確定卵泡優(yōu)勢(shì)與否,優(yōu)勢(shì)卵泡（DF）:E₂/P>1;從屬卵泡（SF）E₂/P<1。分別刮取GCs,提取總RNA并建庫(kù),Illumina測(cè)序,將獲得序列與牛Refseq數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后,利用DESeq2軟件對(duì)獲得的RNA進(jìn)行差異表達(dá)分析,并對(duì)其中表達(dá)下調(diào)的基因進(jìn)行GO和KEGG信號(hào)通路分析,最后通過(guò)Real-time PCR對(duì)篩選出的表達(dá)下調(diào)基因進(jìn)行驗(yàn)證。測(cè)序共獲得32 346個(gè)基因,其中194個(gè)在DF中表達(dá)顯著上調(diào),502個(gè)表達(dá)下調(diào);GO分析結(jié)果顯示,這些下調(diào)基因的生物學(xué)功能共分為3大類(lèi)104組,其中生物學(xué)過(guò)程相關(guān)基因占61.5%,細(xì)胞組分有關(guān)基因占25.0%,分子功能相關(guān)基因占13.5%;KEGG信號(hào)通路分析,共發(fā)現(xiàn)5條通路,其中基因富集最為顯著的是癌癥通路;... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

DF和SF中差異表達(dá)基因火山圖

表6 抑制牛卵泡發(fā)育的候選基因 基因名稱 FPKM lb差異倍數(shù) 基因功能 DF SF PPP1R14A 3.991 68.286 -4.100 平滑肌肌球蛋白磷酸酶的抑制劑 OLA1 1.740 22.711 -3.707 與卵巢癌相關(guān) QRFPR 1.554 19.150 -3.624 G蛋白偶聯(lián)受體活性 EGR1 2.415 17.563 -2.863 參與細(xì)胞凋亡圖3 候選表達(dá)下調(diào)基因在牛DF和SF中的相對(duì)表達(dá)量

圖2 牛DF和SF中下調(diào)表達(dá)基因GO分析IRELAND等[23-25]把直徑≥6 mm的牛卵泡分為E2活躍型卵泡和E2不活躍型泡。E2活躍型卵泡卵泡液中E2>P,且具有健康卵泡的生物學(xué)特性;雌激素不活躍卵泡卵泡液中E2<P,具有閉鎖卵泡或即將走向閉鎖的生物學(xué)特性。AUSTIN等[4]也進(jìn)一步證實(shí)了在牛發(fā)情周期的第一個(gè)卵泡波中,卵泡出現(xiàn)閉鎖之前,SF就失去了分泌E2的能力。所以,在研究通過(guò)分別測(cè)定候選DF和SF中E2和P 的濃度,采用候選DF卵泡液中E2/P>1和候選SF卵泡液中E2/P<1的3對(duì)卵泡作為試驗(yàn)中的DF和SF。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3576802