本研究以新生SD乳鼠顱骨培養(yǎng)的成骨細(xì)胞（OB）為研究對象,在培養(yǎng)至第4代的OB培養(yǎng)液（DMEM）中添加促礦化液（10mmol·L-1β-甘油磷酸鈉、50μg·mL-1抗壞血酸、0.1μmol·L-1地塞米松）和終濃度為0（對照組,CG）,0.52mmolΛL-1（染鋁組,TG）的三氯化鋁（AlCl3·6H2O）。分別在OB染鋁的第7、14和21d,采用茜素紅染色法檢測礦化結(jié)節(jié)；EL1SA法檢測上清中B-ALP活性；比色法和磷鉬酸法檢測上清液中鈣離子（Ca）和無機(jī)磷（Pi）含量；采用蛋白免疫印記法檢測骨橋蛋白（OPN）的蛋白表達(dá)量；實(shí)時熒光定量PCR法檢測Ⅰ型膠原（CoLI）、OPN、骨唾蛋白（BSP）、骨鈣素（OCN）和轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）的基因表達(dá)水平。旨在探討鋁對大鼠OB礦化作用的影響,結(jié)果表明：1、在OB培養(yǎng)的第7、14和21d,TG礦化結(jié)節(jié)均少于CG。隨染鋁時間的延長,CG的礦化結(jié)節(jié)逐漸增加,而TG的逐漸減少,說明染鋁可抑制OB礦化結(jié)節(jié)的形成。2、在OB培養(yǎng)的第7、14和21d,TG的細(xì)胞外Ca濃度低于CG （P<0.01）,Pi濃度高于CG（P<0.... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 鋁對骨的毒性
    1.2 鋁與成骨細(xì)胞礦化
        1.2.1 鋁與鈣磷
        1.2.2 鋁與CoL Ⅰ
        1.2.3 鋁與非膠原蛋白
        1.2.4 鋁與骨源性堿性磷酸酶
        1.2.5 鋁與細(xì)胞調(diào)控因子
    1.3 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗主要儀器與材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
    2.2 大鼠成骨細(xì)胞的培養(yǎng)及處理
        2.2.1 成骨細(xì)胞的提取
        2.2.2 成骨細(xì)胞培養(yǎng)及處理
    2.3 檢測項目與方法
        2.3.1 OB礦化結(jié)節(jié)染色觀察
        2.3.2 OB細(xì)胞外鈣磷濃度的檢測
        2.3.3 CoL Ⅰ、OCN、BSP、OPN和TGF-β_1基因mRNA表達(dá)的檢測
        2.3.4 成骨細(xì)胞OPN蛋白表達(dá)的檢測
        2.3.5 B-ALP活性的檢測
    2.4 實(shí)驗數(shù)據(jù)的分析及統(tǒng)計
3 結(jié)果
    3.1 OB礦化結(jié)節(jié)的觀察
    3.2 細(xì)胞外鈣和磷的濃度
    3.3 OB CoL Ⅰ、OCN、BSP、OPN和TGF-β_1 mRNA表達(dá)
    3.4 成骨細(xì)胞OPN蛋白表達(dá)結(jié)果
    3.5 B-ALP活性
4 討論
    4.1 染鋁對OB礦化結(jié)節(jié)的影響
    4.2 染鋁對OB外鈣磷濃度的影響
    4.3 染鋁對CoL Ⅰ mRNA表達(dá)的影響
    4.4 染鋁對非膠原蛋白表達(dá)的影響
    4.5 染鋁對B-ALP活性的影響
    4.6 染鋁對OB調(diào)控因子TGF-β_1的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]新生兒血清骨堿性磷酸酶、骨鈣蛋白和瘦素水平的變化及臨床意義[D]. 王文英.河北醫(yī)科大學(xué) 2007



本文編號：3575069