豬流行性腹瀉（porcine epidemic diarrhea, PED）是由豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起哺乳仔豬腹瀉、嘔吐、脫水和高致死率為主要特征的一種高度接觸性腸道傳染病,該病對全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究對從遂寧地區(qū)的豬場采集的PED病料分離,然后對分離出的PEDV的M基因進(jìn)行克隆、序列分析、原核表達(dá)載體構(gòu)建、原核表達(dá)、多克隆抗體制備及其抗原性鑒定,為PEDV的進(jìn)一步研究提供參考。1.豬流行性腹瀉病毒的分離和鑒定本研究通過對采集的病料用PK-15傳代細(xì)胞進(jìn)行病毒的分離,通過瓊脂擴(kuò)散和動物回歸試驗鑒定病毒,結(jié)果表明四川遂寧地區(qū)此次仔豬腹瀉是由PEDV引起的,該病毒能使細(xì)胞產(chǎn)生變亮、變圓的病變,待病毒適應(yīng)細(xì)胞之后會有輕微的拉網(wǎng)病變；純化后的病毒經(jīng)RT-PCR檢測、瓊擴(kuò)試驗、動物回歸試驗鑒定為PEDV病毒,并命名為PEDV四川株SC-405,毒株的TCID50為10-2.86/0.1mL。2.豬流行性腹瀉病毒M基因的克隆及序列分析本研究由已知的PEDV標(biāo)準(zhǔn)毒株CV777基因序列,采用Primer5.... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
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第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 豬流行性腹瀉病毒的病原學(xué)特性
        1.1 病原學(xué)
        1.2 PEDV的培養(yǎng)
        1.3 基因組結(jié)構(gòu)
        1.4 流行病學(xué)
        1.5 診斷與防制
        1.6 實驗研究的理論意義
第二章 病毒的分離和鑒定
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 豬外源病毒(RT-)PCR檢測
        2.2 病毒的初步分離
        2.3 分離病毒的純化后檢測
        2.4 瓊擴(kuò)試驗
        2.5 病毒TCID_(50)
        2.6 動物回歸試驗
    3 討論
        3.1 實驗室診斷
        3.2 病毒初步分離
        3.3 病毒純化
        3.4 病毒鑒定
第三章 PEDV M蛋白基因克隆和序列生物信息學(xué)分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 目的基因的PCR擴(kuò)增
        2.2 產(chǎn)物膠回收效果
        2.3 克隆質(zhì)粒的PCR鑒定
        2.4 克隆質(zhì)粒提取和雙酶切鑒定
        2.5 測序結(jié)果
        2.6 序列生物信息學(xué)分析
    3 討論
        3.1 克隆序列分析
        3.2 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
        3.3 PEDV-SC-405M基因編碼蛋白的B細(xì)胞表位分析
第四章 M蛋白的原核表達(dá)及間接ELISA方法的初步建立
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 原核表達(dá)質(zhì)粒鑒定
        2.2 原核表達(dá)產(chǎn)物條件優(yōu)化
        2.3 蛋白純化
        2.4 Western blot鑒定
        2.5 瓊脂擴(kuò)散鑒定免疫原性
    3 討論
        3.1 基因原核表達(dá)
        3.2 誘導(dǎo)表達(dá)的條件優(yōu)化
        3.3 重組蛋白抗原性檢測
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
研究生階段發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]豬流行性腹瀉病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 孫東波,馮力,時洪艷,陳建飛.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2006(10)
[3]豬傳染性胃腸炎病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 李建強(qiáng),柳紀(jì)省,胡永浩,程杰,蘭喜,殷相平,李寶玉,李志勇,楊彬,馬友記.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2006(02)
[4]早期斷奶仔豬腹瀉病藥物防治試驗[J]. 趙青,鐘土木,毛方軍,孫渡江.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2005(02)
[5]黑龍江省規(guī)�；B(yǎng)豬場豬流行性腹瀉診斷和病毒分離鑒定[J]. 孫光,賁百靈,王翠玲,孫廣力,李書華,魏萍,郭昭林,楊本.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2004(06)
[6]RT-PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒方法的建立[J]. 吳國平,尹燕博,孫淑芳,郭福生,何后軍,龔振華.  中國獸醫(yī)雜志. 2003(03)
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[8]豬流行性腹瀉研究概況[J]. 倪艷秀,林繼煌,何孔旺,還紅華.  畜牧與獸醫(yī). 2001(01)
[9]間接法Dot-ELISA檢測豬流行性腹瀉抗體的研究[J]. 陳茹,羅瓊,李樹根,黃俠芳.  中國獸醫(yī)雜志. 1997(08)
[10]應(yīng)用直接免疫熒光法檢測豬流行性腹瀉病毒的研究[J]. 林志雄,黃引賢,李樹根,李力復(fù),童昆周.  中國進(jìn)出境動植檢. 1997(02)



本文編號：3571491