發(fā)布時間：2022-01-06 01:58

　　豬流行性腹瀉（porcine epidemic diarrhea, PED）是由豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起哺乳仔豬腹瀉、嘔吐、脫水和高致死率為主要特征的一種高度接觸性腸道傳染病,該病對全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經濟損失。本研究對從遂寧地區(qū)的豬場采集的PED病料分離,然后對分離出的PEDV的M基因進行克隆、序列分析、原核表達載體構建、原核表達、多克隆抗體制備及其抗原性鑒定,為PEDV的進一步研究提供參考。1.豬流行性腹瀉病毒的分離和鑒定本研究通過對采集的病料用PK-15傳代細胞進行病毒的分離,通過瓊脂擴散和動物回歸試驗鑒定病毒,結果表明四川遂寧地區(qū)此次仔豬腹瀉是由PEDV引起的,該病毒能使細胞產生變亮、變圓的病變,待病毒適應細胞之后會有輕微的拉網病變；純化后的病毒經RT-PCR檢測、瓊擴試驗、動物回歸試驗鑒定為PEDV病毒,并命名為PEDV四川株SC-405,毒株的TCID50為10-2.86/0.1mL。2.豬流行性腹瀉病毒M基因的克隆及序列分析本研究由已知的PEDV標準毒株CV777基因序列,采用Primer5.... 

【文章來源】：四川農業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文對照表
第一章 文獻綜述
    1 豬流行性腹瀉病毒的病原學特性
        1.1 病原學
        1.2 PEDV的培養(yǎng)
        1.3 基因組結構
        1.4 流行病學
        1.5 診斷與防制
        1.6 實驗研究的理論意義
第二章 病毒的分離和鑒定
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果
        2.1 豬外源病毒(RT-)PCR檢測
        2.2 病毒的初步分離
        2.3 分離病毒的純化后檢測
        2.4 瓊擴試驗
        2.5 病毒TCID_(50)
        2.6 動物回歸試驗
    3 討論
        3.1 實驗室診斷
        3.2 病毒初步分離
        3.3 病毒純化
        3.4 病毒鑒定
第三章 PEDV M蛋白基因克隆和序列生物信息學分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果
        2.1 目的基因的PCR擴增
        2.2 產物膠回收效果
        2.3 克隆質粒的PCR鑒定
        2.4 克隆質粒提取和雙酶切鑒定
        2.5 測序結果
        2.6 序列生物信息學分析
    3 討論
        3.1 克隆序列分析
        3.2 系統(tǒng)進化樹分析
        3.3 PEDV-SC-405M基因編碼蛋白的B細胞表位分析
第四章 M蛋白的原核表達及間接ELISA方法的初步建立
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結果
        2.1 原核表達質粒鑒定
        2.2 原核表達產物條件優(yōu)化
        2.3 蛋白純化
        2.4 Western blot鑒定
        2.5 瓊脂擴散鑒定免疫原性
    3 討論
        3.1 基因原核表達
        3.2 誘導表達的條件優(yōu)化
        3.3 重組蛋白抗原性檢測
第五章 結論
參考文獻
致謝
研究生階段發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]豬流行性腹瀉病毒分子生物學研究進展[J]. 孫東波,馮力,時洪艷,陳建飛.  動物醫(yī)學進展. 2006(10)
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本文編號：3571491