聯(lián)合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（Combination antiretroviral therapy,cART）對(duì)靜息CD4+T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞中呈潛伏感染狀態(tài)的HIV-1病毒很難發(fā)揮清除作用,其原因是呈潛伏感染的HIV-1病毒處于轉(zhuǎn)錄沉默狀態(tài),很難被靶向藥物識(shí)別。HIV-1潛伏感染的形成與轉(zhuǎn)錄因子例如NF-κB、AP-1等的生物學(xué)活性密切相關(guān)。這些轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控HIV-1前病毒DNA的轉(zhuǎn)錄作用受抑制或喪失,是靜息CD4+T細(xì)胞中病毒轉(zhuǎn)錄起始受到抑制的主要原因之一。JunD是激活蛋白-1（Activating protein-1,AP-1）家族的成員之一,與c-Jun、JunB等家族其他成員相類似,其通過(guò)結(jié)合靶基因的啟動(dòng)子區(qū)調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。已有研究證明,AP-1家族的c-Jun等轉(zhuǎn)錄因子可以結(jié)合不同HIV-1亞型LTR上的AP-1結(jié)合位點(diǎn),參與對(duì)HIV-1前病毒轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。然而,JunD是否可通過(guò)結(jié)合LTR參與調(diào)控HIV-1前病毒轉(zhuǎn)錄,并借由此在HIV-1潛伏感染與病毒儲(chǔ)存庫(kù)的形成中發(fā)揮作用?尚未見(jiàn)相關(guān)研究。為回答上述科學(xué)問(wèn)題,本研究基于可支持HIV-1復(fù)制的T細(xì)胞系Jurkat,采用CRISP... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HIV-1的LTR結(jié)構(gòu)特征及病毒核心啟動(dòng)子序列（UriMbonyeetal.,2017）

圖 1.1 HIV-1 的 LTR 結(jié)構(gòu)特征及病毒核心啟動(dòng)子序列（Uri Mbonye et al., 2017）Fig.1.1 Structure of the viral long terminal repeat and sequence of the viral core promoter

鏈結(jié)構(gòu)域（Leucine zipper domain）（圖 1.3）。轉(zhuǎn)錄因子 JunD 是一種核蛋白，NLS 將其定位細(xì)胞核；JNK 連接結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé) JunD 與其信號(hào)通路上游蛋白 JNK 相互作用，接受上游信號(hào)并發(fā)磷酸化；DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域大小為 20 個(gè)氨基酸，負(fù)責(zé)識(shí)別并結(jié)合具有 TGAC 序列特征的靶基啟動(dòng)子，激活或抑制靶基因的表達(dá)；亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域大小為 29 個(gè)氨基酸，負(fù)責(zé) JunD 與自或 AP-1 家族其他成員結(jié)合，形成同源或異源二聚體來(lái)發(fā)揮功能。此外，junD 基因的 mRNA 有兩個(gè)用于翻譯起始的密碼子 AUG，可以翻譯成兩種亞型的 JunD 蛋白。細(xì)胞中除了全長(zhǎng) 3個(gè)氨基酸的 JunD-FL 蛋白外，還存在 N 端缺失 43 個(gè)氨基酸的截短型ΔJunD 蛋白，二者都發(fā)揮功能（圖 1.3）。JunD 在表達(dá)模式及生物學(xué)功能方面不同于 AP-1 家族其他蛋白。大多數(shù) AP蛋白屬于典型的立早基因（Immediate early genes，IEGs），靜息細(xì)胞只有在受到血清刺激后可以短暫地激活表達(dá)這些蛋白，并且 30 min 后被降解，因此通常檢測(cè)不到蛋白的表達(dá)（Herschma1991）。不同的是，JunD 不受血清刺激的影響，且 JunD 雖然也會(huì)發(fā)生降解，但當(dāng)細(xì)胞周期進(jìn)G1 期后，JunD 又會(huì)開(kāi)始表達(dá)，并最終呈現(xiàn)一種組成性表達(dá)的狀態(tài)（Pfarr et al., 1994）。這是為 JunD 受轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的方式調(diào)控，其啟動(dòng)子具有組成性，從而可以使 JunD 蛋白水平保持穩(wěn)（Baird et al., 2006）。


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