發(fā)布時(shí)間：2022-01-05 22:00

　　玉米赤霉烯酮（Zearalenone, ZEA）是一種非甾體雌激素樣作用的霉菌毒素,它廣泛存在于世界各地谷類食品中。ZEA具有生殖毒性、遺傳毒性和免疫毒性等。然而關(guān)于ZEA暴露對雄性動(dòng)物睪丸間質(zhì)細(xì)胞（Leydig cells）凋亡和自噬的研究報(bào)道較少,為探究ZEA雄性生殖毒性的機(jī)理,本實(shí)驗(yàn)以分離的大鼠原代睪丸間質(zhì)細(xì)胞建立模型,對ZEA在體外誘導(dǎo)Leydig細(xì)胞凋亡與自噬、誘導(dǎo)凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以及自噬與凋亡的關(guān)系進(jìn)行了研究。主要研究內(nèi)容如下：1.ZEA誘導(dǎo)Leydig細(xì)胞凋亡。以0,2.5,5,10,20μg/mL的ZEA處理原代Leydig細(xì)胞12h, MTT法檢測ZEA抑制Leydig細(xì)胞的活力影響；Hochest33258染色和透射電鏡觀察細(xì)胞核形態(tài)的變化；Annexin V-FITC/PI雙熒光染色法定量檢測ZEA對Leydig細(xì)胞凋亡的變化。結(jié)果顯示,不同濃度的ZEA處理Leydig細(xì)胞12h后,細(xì)胞活率極顯著低于對照組（p<0.01）;20μg/mL的ZEA處理后12h后,細(xì)胞核發(fā)生明顯的固縮、染色質(zhì)凝聚等凋亡特征；電子顯微鏡觀察到ZEA處理的Leydig細(xì)胞發(fā)生染色... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 細(xì)胞凋亡和自噬
        1 細(xì)胞凋亡
            1.1 內(nèi)源性途徑
            1.2 外源性途徑
            1.3 Caspase家族/Bcl-2家族
        2 細(xì)胞自噬
            2.1 自噬的過程
            2.2 自噬過程的調(diào)控
        3 凋亡與自噬
    第二章 玉米赤霉烯酮研究進(jìn)展
        1 ZEA的簡介
            1.1 ZEA的結(jié)構(gòu)
            1.2 ZEA的污染狀況
        2 ZEA的一般毒性
            2.1 生殖發(fā)育毒性
            2.2 免疫毒性
            2.3 遺傳毒性
            2.4 ZEA對腫瘤發(fā)生的影響
            2.5 ZEA的細(xì)胞毒性
        3 ZEA的雄性生殖毒性及其機(jī)理
下篇 實(shí)驗(yàn)部分
    第三章 ZEA誘導(dǎo)大鼠LEYDIG細(xì)胞凋亡
        1 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 Leydig細(xì)胞原代培養(yǎng)
            2.3 分離大鼠Leydig細(xì)胞的計(jì)數(shù)與活率鑒定
            2.4 分離大鼠Leydig細(xì)胞的純度鑒定
            2.5 MTT法
            2.6 Hochest 33258染色
            2.7 透射電鏡觀察
            2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡
            2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 細(xì)胞活率及純度
            3.2 ZEA對大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞活力的影響
            3.3 Hoches 33258染色
            3.4 透射電鏡觀察
            3.5 流式細(xì)胞術(shù)定量測定細(xì)胞凋亡
        4 討論
        5 小結(jié)
    第四章 ZEA誘導(dǎo)LEYDIG細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 免疫印跡
            2.2 JC-1測定線粒體膜電位
            2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 線粒體膜電位額變化
            3.2 ZEA對Leydig細(xì)胞中的Bax和Bcl-2表達(dá)的影響
            3.3 細(xì)胞色素C的釋放
            3.4 Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)在ZEA誘導(dǎo)大鼠Leydig細(xì)胞凋亡中的作用
            3.5 Z-VAD-fmk對Leydig細(xì)胞的保護(hù)作用
            3.6 Z-VAD-fmk對Leydig細(xì)胞凋亡的影響
            3.7 Z-VAD-fmk對ZEA誘導(dǎo)Lyedig細(xì)胞Caspase-9,-3活性的影響
            3.8 Z-VAD-fmk對ZEA誘導(dǎo)Lyedig細(xì)胞PARP活性影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第五章 ZEA誘導(dǎo)大鼠LEYDIG細(xì)胞自噬
        1 材料
            1.1 主要試劑
            1.2 主要儀器
        2 方法
            2.1 酸性囊泡(AVOs)鏡檢觀察
            2.2 AO染色后FCM定量分析AVOs
            2.3 ZEA處理后對Leydig細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            2.4 ZEA處理后的Leydig細(xì)胞中自噬LC3轉(zhuǎn)移與定位
            2.5 透射電鏡觀察自噬泡
        3 結(jié)果
            3.1 AVOs鏡檢觀察
            3.2 AO染色后FCM定量分析
            3.3 ZEA處理Leydig細(xì)胞后標(biāo)志性自噬蛋白的表達(dá)
            3.4 ZEA處理后的Leydig細(xì)胞中自噬LC3轉(zhuǎn)移與定位
            3.5 透射電鏡觀察ZEA處理Leydig細(xì)胞機(jī)構(gòu)變化
        4 討論
        5 小結(jié)
    第六章 自噬在ZEA誘導(dǎo)LEYDIG細(xì)胞凋亡中的作用
        1 材料
            1.1 主要試劑
            1.2 主要儀器
        2 方法
            2.1 RAP和CQ對ZEA處理的Leydig細(xì)胞LC3蛋白的影響
            2.2 自噬延遲凋亡的作用
        3 結(jié)果
            3.1 自噬誘導(dǎo)劑RAP對ZEA處理的Leydig細(xì)胞LC3蛋白的影響
            3.2 自噬抑制劑CQ對ZEA處理的Leydig細(xì)胞LC3蛋白的影響
            3.3 自噬延遲凋亡的作用
        4 討論
        5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3571152