線(xiàn)粒體DNA（mitochondrial DNA）是動(dòng)物細(xì)胞中核外唯一遺傳物質(zhì),其拷貝數(shù)是衡量細(xì)胞中線(xiàn)粒體數(shù)目的重要標(biāo)志。根據(jù)組織細(xì)胞的能量需求及耗氧量,在哺乳動(dòng)物體細(xì)胞中數(shù)目為～1,000-10,000不等拷貝數(shù)。在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,組織中mtDNA拷貝數(shù)也有不同的變化趨勢(shì),以滿(mǎn)足組織的能量代謝需求。mtDNA編碼37個(gè)基因,包括2個(gè)rRNA,13個(gè)蛋白和22個(gè)tRNA。線(xiàn)粒體是半自主細(xì)胞器,因?yàn)闃?gòu)成線(xiàn)粒體的其他蛋白以及參與mtDNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的相關(guān)酶類(lèi)及分子均是由核基因組編碼,因此線(xiàn)粒體的遺傳體系是依賴(lài)核基因組,其中TWINKLE是線(xiàn)粒體中唯一的DNA解旋酶,參與mtDNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄過(guò)程。此外,大量研究發(fā)現(xiàn)在哺乳動(dòng)物中,伴隨著生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程,mtDNA會(huì)出現(xiàn)長(zhǎng)片段缺失變異,導(dǎo)致細(xì)胞組織功能異常。研究顯示,線(xiàn)粒體中存在轉(zhuǎn)錄前調(diào)控,發(fā)現(xiàn)線(xiàn)粒體DNA序列中存在多個(gè)CpG位點(diǎn)及甲基轉(zhuǎn)移酶,推測(cè)線(xiàn)粒體基因轉(zhuǎn)錄受到了甲基化的調(diào)控。對(duì)所有試驗(yàn)樣品mtDNA是否存在片段缺失進(jìn)行檢測(cè),本試驗(yàn)設(shè)計(jì)了5對(duì)引物對(duì)mtDNA全序列進(jìn)行l(wèi)ong PCR擴(kuò)增,片段長(zhǎng)度為1.5kb～5.5kb,凝膠電泳后,未在樣品中... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 線(xiàn)粒體(mitochondrion)
    1.2 線(xiàn)粒體DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)
    1.3 mtDNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄
    1.4 mtDNA拷貝數(shù)(mtDNA copy number)
    1.5 mtDNA甲基化
    1.6 Long PCR
    1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Q-PCR)
2. 研究目的及意義
3. 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 樣品采集
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)所需試劑(盒)
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 DNA提取及檢測(cè)
        3.2.2 總RNA提取及檢測(cè)
        3.2.3 PCR引物設(shè)計(jì)及合成
        3.2.4 Long PCR
        3.2.5 定量各樣品中mtDNA拷貝數(shù)
        3.2.6 mRNA反轉(zhuǎn)錄
        3.2.7 定量各樣品中線(xiàn)粒體基因及核基因相關(guān)基因表達(dá)
        3.2.8 mtDNA甲基化檢測(cè)
        3.2.9 數(shù)據(jù)分析
4. 試驗(yàn)結(jié)果
    4.1 各擴(kuò)增片段擴(kuò)增效果無(wú)差異
    4.2 樣品mtDNA不存在大片段缺失
    4.3 組織中mtDNA拷貝數(shù)存在差異
    4.4 TWINKLE基因表達(dá)量與mtDNA拷貝數(shù)有顯著線(xiàn)性關(guān)系
    4.5 線(xiàn)粒體基因表達(dá)量與mtDNA拷貝數(shù)存在顯著線(xiàn)性關(guān)系
    4.6 mtDNA D-loop區(qū)域存在甲基化
5. 討論
    5.1 mtDNA擴(kuò)增片段選擇分析
    5.2 mtDNA拷貝數(shù)的時(shí)空差異性分析
    5.3 核基因及線(xiàn)粒體基因與mtDNA拷貝數(shù)關(guān)聯(lián)性分析
    5.4 mtDNA D-loop區(qū)域甲基化分析
6. 結(jié)論
7. 參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3570595