鵝肥肝是世界三大美食之一。填飼是獲得鵝肥肝的重要技術(shù)手段。經(jīng)過填飼后,鵝肝中含有大量對(duì)人體健康有益的不飽和脂肪酸、卵磷脂、微量元素等,具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。以往的研究多關(guān)注于肝臟脂肪酸的研究,而關(guān)于膽固醇方面的文獻(xiàn)報(bào)道甚少,也沒有關(guān)于填飼對(duì)鵝肝臟膽固醇含量影響的報(bào)道。HMGCS1基因參與調(diào)控HMG-CoA合成酶的生成,該酶是肝臟膽固醇生物合成中的關(guān)鍵酶,其功能是將乙酰CoA和乙酰乙酰CoA縮合為HMG-CoA。該基因與膽固醇的合成密切相關(guān)。本試驗(yàn)旨在獲得鵝HMGCS1基因的cDNA序列,觀察該基因與填飼鵝肝臟生成膽固醇的相關(guān)性。運(yùn)用RACE方法擴(kuò)增目的基因的cDNA序列,進(jìn)行生物信息學(xué)分析。對(duì)填飼鵝進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和組織切片觀察,同時(shí)對(duì)朗德鵝的體重、肝重、肝重指數(shù)等屠宰性狀進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。并選用膽固醇試劑盒測(cè)定鵝肝中膽固醇的含量。在分子生物技術(shù)方面,利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)并分析HMGCS1基因在各組織中mRNA的表達(dá),同時(shí)比較填飼后各組織HMGCS1基因表達(dá)的變化。在體外試驗(yàn)方面,通過對(duì)半原位灌注法的改進(jìn),分離培養(yǎng)鵝肝細(xì)胞,觀察細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化,探究各類脂肪酸、葡萄糖和胰島素對(duì)鵝肝細(xì)胞脂肪沉... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 膽固醇代謝調(diào)控研究進(jìn)展
        1.1.1 膽固醇代謝
        1.1.2 HMGCS1基因的研究進(jìn)展
    1.2 RACE和基因克隆
        1.2.1 RACE概述
        1.2.2 原理及方法
    1.3 動(dòng)物肝細(xì)胞培養(yǎng)的研究進(jìn)展
        1.3.1 原代肝細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
        1.3.2 動(dòng)物肝細(xì)胞研究進(jìn)展
    1.4 RNA干擾技術(shù)
        1.4.1 RNA干擾技術(shù)的發(fā)展
        1.4.2 siRNA結(jié)構(gòu)與設(shè)計(jì)
第二章 HMGCS1基因cDNA克隆及生物信息學(xué)分析
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 鵝肝組織總RNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
        2.3.2 鵝HMGCS1基因RT-PCR結(jié)果
        2.3.3 鵝HMGCS1基因cDNA序列
    2.4 討論
第三章 HMGCS1基因的組織特異性表達(dá)
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.2 試劑和耗材
        3.2.3 試驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 總RNA粗提結(jié)果驗(yàn)證
        3.3.2 擴(kuò)增效率檢測(cè)
        3.3.3 HMGCS1基因在各組織中的分布
    3.4 討論
第四章 膽固醇在肝臟中的含量測(cè)定
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.2 試劑和耗材
        4.2.3 主要儀器
        4.2.4 試驗(yàn)方法
        4.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察
        4.3.2 肝臟組織切片觀察
        4.3.3 膽固醇含量測(cè)定結(jié)果
    4.4 討論
第五章 脂肪酸、胰島素及葡萄糖對(duì)鵝肝細(xì)胞中脂肪酸沉積及HMGCS1基因表達(dá)的影響
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        5.2.2 試劑與材料
        5.2.3 方法
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 鵝原代肝細(xì)胞形態(tài)觀察
        5.3.2 油紅O染色后肝細(xì)胞形態(tài)觀察
        5.3.3 脂肪酸、葡萄糖以及胰島素處理肝細(xì)胞后Neilred染色及HMGCS1基因的表達(dá)
    5.4 討論
全文總結(jié)和展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3569558