p30蛋白是非洲豬瘟病毒（ASFV）的膜蛋白,在病毒感染早期分泌表達(dá),含量豐富且抗原性較高,是重要的病毒早期診斷靶標(biāo)。本研究以ASFV基因Ⅱ型格魯吉亞2007株p30基因的質(zhì)粒為模板擴(kuò)增p30基因片段,連接至原核表達(dá)載體pET-28a,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Rosetta后,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)和鎳柱純化;將純化后的重組p30蛋白作為免疫原免疫BALB/c小鼠,通過雜交瘤細(xì)胞融合和間接ELISA方法,篩選出了2株能夠穩(wěn)定分泌抗p30蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,并通過制備腹水的方法獲得單克隆抗體;最后經(jīng)Western-blot和IFA試驗(yàn)鑒定,其均能與ASFV感染細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)。本研究為ASFV感染的診斷和致病機(jī)制研究提供了重要材料。 

【文章來源】：中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(08)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

p30重組蛋白的SDS-PAGE鑒定

成功表達(dá)在包涵體的p30蛋白，用結(jié)合緩沖液溶解過夜后，將表達(dá)產(chǎn)物通過AKTA蛋白純化系統(tǒng)結(jié)合到帶有His標(biāo)簽的鎳柱上，洗脫后獲得較高純度和濃度的目的蛋白（圖3）。2.3 單克隆抗體的亞型鑒定

ASFV感染PAM細(xì)胞24 h后，通過間接免疫熒光試驗(yàn)來驗(yàn)證2株單克隆抗體的特異性，結(jié)果（圖6）顯示，在有ASFV感染的細(xì)胞組中，2株單抗均可與感染ASFV的細(xì)胞產(chǎn)生特異性的熒光，且熒光基本分布在細(xì)胞質(zhì)中，而未接毒組的細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)特異性熒光。圖5 單克隆抗體的Western-blot鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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