發(fā)布時間：2017-05-11 04:11

  本文關(guān)鍵詞：禽呼腸孤病毒p17非結(jié)構(gòu)蛋白調(diào)控c-myc基因表達的信號通路研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：禽呼腸孤病毒(ARV)屬于呼腸孤病毒科中的正呼腸孤病毒屬,是一種重要的家禽病原體。ARV感染禽類可引起多種疾病并且會導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟損失,常見的有病毒性關(guān)節(jié)炎/腱鞘炎、吸收障礙綜合征(MAS)、免疫抑制等疾病,但其發(fā)病機制仍了解甚少。ARV非結(jié)構(gòu)蛋白p17可以參與細(xì)胞核中一些反應(yīng)過程,如基因轉(zhuǎn)錄、DNA結(jié)合、細(xì)胞生長調(diào)節(jié)、細(xì)胞的自噬,細(xì)胞周期調(diào)節(jié)等。c-myc基因基因家族屬于癌基因中的核蛋白類調(diào)控基因,在細(xì)胞增殖、永生化、去分化和誘導(dǎo)凋亡等多方面起到調(diào)節(jié)作用。實驗室初次發(fā)現(xiàn)非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因的表達有影響,且實驗室初期研究ARV非結(jié)構(gòu)蛋白p17對細(xì)胞自噬,細(xì)胞周期,細(xì)胞凋亡的研究取得一定成果。本試驗旨在研究ARV非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因基因的表達調(diào)控,并進一步探究ARV非結(jié)構(gòu)蛋白p17是通過哪種信號通路調(diào)控c-myc基因的表達,以及非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因調(diào)控的信號機制,從而通過使用對此信號通路各關(guān)鍵點針對性的阻斷劑或shRNA抑制原癌基因的表達,對ARV病毒在宿主細(xì)胞的調(diào)節(jié)提供新的研究方向,并進一步用于ARV的臨床防控。1.通過冷光試驗檢測c-myc基因reporter在0 h,6 h,12 h,18 h和24 h的空白對照組,感染ARV組以及轉(zhuǎn)染ARV非結(jié)構(gòu)蛋白p17組的c-myc基因表達活性的強弱。將實驗室已有重組質(zhì)粒PCDNA3.1-p17與c-myc reporter質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染于DF-1,Vero以及Hela細(xì)胞,同時將ARV病毒以5 MOI(1.0×108 PFU/mL)分別接入DF-1,Vero,Hela細(xì)胞,未感染ARV病毒的細(xì)胞作為空白對照組。結(jié)果表明,ARV感染組的細(xì)胞對c-myc基因活性表達有抑制效果,非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因的表達活性抑制作用更加明顯。細(xì)胞在接種ARV后6 h,12h,18 h測得的c-myc基因的活性與對照組相比并未有抑制作用,但于24h出現(xiàn)了抑制作用。非結(jié)構(gòu)蛋白p17質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后6 h、12 h、18 h、24 h檢測的c-myc基因活性表達持續(xù)減弱,表明了非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因表達活性有抑制作用。2.實驗室前期研究表明,ARV非結(jié)構(gòu)蛋白非結(jié)構(gòu)蛋白p17對AKT和mTOR有抑制作用,并且是通過ARV介導(dǎo)的自噬依賴的PI3K/AKT/mTOR途徑。本實驗利用Western Blot檢測非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因表達的抑制,結(jié)果表明p17對c-myc基因的表達抑制是通過PI3K/AKT/mTOR/FOXO1信號通路。
【關(guān)鍵詞】：禽呼腸孤病毒 非結(jié)構(gòu)蛋白p17 c-myc基因 信號通路 冷光試驗
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 文獻綜述10-15
• 第一章 禽呼腸孤病毒（ARV）非結(jié)構(gòu)蛋白p17的研究進展10-15
• 1.1 禽呼腸孤病毒（ARV）非結(jié)構(gòu)蛋白的種類10-11
• 1.2 非結(jié)構(gòu)蛋白p17的作用11-13
• 1.2.1 非結(jié)構(gòu)蛋白p17對細(xì)胞的自噬作用11-12
• 1.2.2 非結(jié)構(gòu)蛋白p17對細(xì)胞周期的作用12
• 1.2.3 非結(jié)構(gòu)蛋白p17對AKT, PTEN, mTOR的作用12-13
• 1.2.4 非結(jié)構(gòu)蛋白p17與c-myc基因關(guān)系13
• 1.3 本課題研究的目的和內(nèi)容13-15
• 試驗研究15-36
• 第二章 禽呼腸孤病毒（ARV）及其非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因的調(diào)控作用15-23
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 細(xì)胞16
• 2.1.2 病毒，菌株和載體16
• 2.1.3 主要試劑16
• 2.1.4 主要儀器16
• 2.1.5 常用試劑配制16-17
• 2.2 方法17-19
• 2.2.1 禽呼腸孤病毒（ARV）攻毒實驗17-18
• 2.2.3 c-myc基因reporter與PCDNA3.1- p17共轉(zhuǎn)染實驗18
• 2.2.4 禽呼腸孤病毒（ARV）及其非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因的作用18-19
• 2.3 結(jié)果19-20
• 2.3.1 質(zhì)粒的提取19
• 2.3.2 禽呼腸孤病毒（ARV）及其非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因的作用19-20
• 2.4 討論20-22
• 2.5 小結(jié)22-23
• 第三章 禽呼腸孤病毒（ARV）非結(jié)構(gòu)蛋白p17對c-myc基因調(diào)控的信號通路研究23-36
• 3.1 材料23-24
• 3.1.1 細(xì)胞、病毒與質(zhì)粒23-24
• 3.1.2 主要試劑24
• 3.1.3 主要儀器24
• 3.1.4 常用試劑的配制24
• 3.2 方法24-30
• 3.2.1 禽呼腸孤病毒（ARV） S1133疫苗株增毒實驗24-25
• 3.2.2 PCDNA3.1-p17,Vector質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及重提25-26
• 3.2.3 冷光試驗測定InsuLion對AKT活性的影響26-27
• 3.2.4 Western Blot檢測各相關(guān)蛋白量的變化27-29
• 3.2.5 免疫共沉淀實驗29-30
• 3.3 結(jié)果30-34
• 3.3.1 ARV S1133疫苗株增毒實驗30
• 3.3.2 胰島素（InsuLion）對AKT的影響30-31
• 3.3.3 Western Blot檢測相關(guān)蛋白量的變化及其灰度值分析31-34
• 3.4 討論34-35
• 3.5 小結(jié)35-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-41
• 致謝41-42
• 作者簡介42

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