發(fā)布時間：2021-12-31 19:05

　　本實驗以小尾寒羊為實驗動物研究由金黃色葡萄球菌引起的乳房炎,探究TLRs和CK的表達及與乳房炎之間的關(guān)系。利用實時熒光定量PCR方法（FQ RT-PCR）檢測TLRs基因在感染金黃色葡萄球菌后12 h、24 h、36 h、48 h和72 h的乳腺組織及外周血白細胞中的相對表達量;用Western-blot方法檢測感染金黃色葡萄球菌12 h、24 h、36 h、48 h、72 h后,TLRs蛋白在小尾寒羊乳腺組織中的表達情況;用ELISA法檢測血清中TNF-α、IFN-α、IL-1β、IL-16的濃度。結(jié)果表明:TLRs在感染后的乳腺組織及外周血白細胞中差異表達。感染后的外周血白細胞中,TLR8未表達,TLR2在12 h的表達量顯著升高;TLR6、TLR7在48 h的表達量顯著升高;TLR1、TLR3、TLR4的表達量均低于對照組;TLR9在12 h和24 h以及TLR5、10在12 h的表達量無差異,其余時間段的表達量低于對照組。感染后的乳腺組織中,除TLR8和TLR9無表達外,其它TLRs均表達。TLR2在各時段的表達量均高于對照組,在12 h、24 h和36 h的表達量顯著升高;T... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

外周血白細胞中TLR1~10基因的PCR檢測Fig1ThePCRdetectionofTLR1~10geneinPeripheralbloodleukocyte

圖 2-1 外周血白細胞中 TLR1~10 基因的 PCR 檢測Fig 1 The PCR detection of TLR1~10 gene in Peripheral blood leDL750 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1~10 分別代表的是 TLR1~TLR10 的擴增產(chǎn)物DL750 DNALadder;1~10 respective the products amplified of TLR1 to TLR10 TLR1~10 基因進行 PCR 擴增，擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，可段大小一致的電泳條帶。由圖 2-1 可以看出感染金黃色葡萄球菌后小細胞中除 TLR8 無條帶，其余 TLRs 均出現(xiàn)強弱不同的條帶。

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士畢業(yè)生2.2 TLRs 的溶解曲線熒光定量PCR常用于基因定量和準(zhǔn)確定量目的基因的表達，不僅可以實時檢測的產(chǎn)物量，還可以通過溶解曲線識別擴增產(chǎn)物的單一性和引物二聚體。利用 ABI熒光定量 PCR 儀分別將 TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9、T及β-actin 進行擴增，擴增 40 個循環(huán)后，溶解曲線有單一峰，目的性產(chǎn)物的特異性較（如圖 2-3 所示）

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]TLR2、TLR4基因在小尾寒羊乳房炎乳腺組織中表達的研究[D]. 陳富強.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]游泳運動對小鼠脾臟TLR2、TLR4誘導(dǎo)表達作用的實驗研究[D]. 吳嬪赟.蘇州大學(xué) 2011
[3]TLR2基因多態(tài)性及其與奶牛乳房炎的相關(guān)分析[D]. 劉利.吉林大學(xué) 2009
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本文編號：3560806