在前期研究中,從巨型艾美耳球蟲（Eimeria maxima）cDNA文庫(kù)中篩選到了免疫保護(hù)性抗原偏菱形樣蛋白EmRP,本研究為揭示該抗原的免疫保護(hù)機(jī)理,進(jìn)一步檢測(cè)了其免疫原性。以E.maxima卵囊cDNA為模板,用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增EmRP,并構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-EmRP,將其經(jīng)腿部肌肉注射2周齡的雛雞,3周齡加強(qiáng)免疫。分別于首次免疫后和加強(qiáng)免疫后1周,采集血清,用ELISA方法檢測(cè)血清特異性IgG水平,用熒光定量PCR方法（qPCR）檢測(cè)細(xì)胞因子水平,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4⁺T淋巴細(xì)胞和CD8⁺T淋巴細(xì)胞的比例,分析EmRP誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。序列分析表明,EmRP含有偏菱形樣蛋白超家族成員保守區(qū)域,為非跨膜蛋白,分子量約為28.4 kD。真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-EmRP免疫雞后,與對(duì)照組相比,雞體IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17等細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平顯著提升;CD8⁺和CD4⁺ T細(xì)胞比例顯著提高,而血清特異性IgG水平與對(duì)照組差異不顯著。結(jié)果表明,EmRP誘導(dǎo)的免疫保護(hù)作用主... 

【文章來(lái)源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(04)北大核心

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瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)EmRP擴(kuò)增產(chǎn)物

重組質(zhì)粒pVAX1-EmRP的酶切鑒定

如表2所示,流式細(xì)胞術(shù)分析雞脾臟中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例在首次免疫后和加強(qiáng)免疫后的變化,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組pVAX1組和PBS組相比,兩次免疫后試驗(yàn)組CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞比例都顯著升高(P<0.05)。表2 免疫后雞脾臟淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞亞類的百分比 % 表面標(biāo)記物 組別 首次免疫 加強(qiáng)免疫 CD4+/CD3+ PBS 4.28±1.97b 13.44±1.27b pVAX1 5.62±1.47b 14.12±0.37b EmRP 17.59±9.09a 24.02±4.00a CD8+/CD3+ PBS 14.58±2.01b 22.00±0.79b pVAX1 16.11±0.51b 23.00±0.79b EmRP 23.42±5.33a 32.22±1.11a 注:同一列中,肩標(biāo)含不同字母表示差異顯著性(P<0.05),含相同字母表示差異不顯著性(P>0.05)


本文編號(hào)：3558528