布魯氏菌�。˙rucellosis）是由布魯氏菌（Brucella.app）引起的人畜共患病,流行較廣,危害巨大,主要造成波狀熱和慢性感染,引起流產(chǎn)和不孕不育,嚴(yán)重危害了人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展。目前研究較多的布魯氏菌疫苗主要有滅活疫苗、減毒活疫苗和亞單位疫苗,但滅活疫苗引起免疫效果差,減毒活疫苗又存在接種后出現(xiàn)強(qiáng)烈副反應(yīng)、免疫與感染的難以鑒別,以及個(gè)別情況下出現(xiàn)菌毒回升等缺點(diǎn),因此尋找有效的布魯氏菌亞單位疫苗已成為研究重點(diǎn)。本研究通過PCR擴(kuò)增得到L7/L12和Omp16基因片段,構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-L7/L12和pET-28a-Omp16,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后得到rL7/L12蛋白和rOmp16蛋白。Overlap PCR擴(kuò)增L7/L12-Omp16融合基因片段,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-L7/L12-Omp16,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后進(jìn)行間接免疫熒光檢測,結(jié)果顯示,該DNA疫苗可在真核細(xì)胞中高效表達(dá)。同時(shí),構(gòu)建pMV306-L7/L12-Omp16重組質(zhì)粒,電轉(zhuǎn)化至BCG感受態(tài)細(xì)胞制備重組BCG載體疫苗,Western Blot驗(yàn)證結(jié)果表明,L7/L12-Omp16融合蛋... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Omp16基因的PCR擴(kuò)增M:DL2000DNAMaker

重組質(zhì)粒pET-28a-L7/L12PCR及雙酶切鑒定

.3 L7/L12 和 Omp16 蛋白的表達(dá)及純化將重組菌擴(kuò)大培養(yǎng)后 IPTG 誘導(dǎo) 3h，收集菌體超聲破碎，菌體裂解液的上沉淀進(jìn)行 15% SDS-PAGE 分析，可見重組 L7/L12 蛋白在大腸桿菌中高水平，相對分子質(zhì)量約為 17 ku，且以可溶和包涵體兩種形式存在見圖 1.5。重p16 蛋白在大腸桿菌中主要以包涵體形式存在，相對分子質(zhì)量約為 16 ku，.3 重組質(zhì)粒 pET-28a-L7/L12 PCR 及雙酶切鑒定NA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn); 1. pET-28a-L7/L12 的雙酶切產(chǎn)物; 2. PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物；g.2 PCR and restriction enzyme digestionanalysis of the recombinant plasmidpET-28a-L7/L12. DL5000 DNA Marker; 1. Product fromET-28a-L7/L12 digested with restrictionenzymes; 2.PCR Product圖 1.4 重組質(zhì)粒 pET-28a-Omp16 PCR 切鑒定M. DNA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn); 1. pET-28a-Om雙酶切產(chǎn)物; 2. PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物；Fig.2 PCR and restriction enzyme digeanalysis of the recombinant plasmipET-28a-Omp16M. DL5000 DNA Marker; 1. Product fpET-28a-Omp16 digested with restricenzymes; 2.PCR Product


本文編號：3557380