發(fā)布時間：2021-12-29 07:29

　　豬鏈球菌2型(Streptococcus suis serotype2，SS2)是近年來新發(fā)的一種重要的人獸共患病病原體，人經(jīng)傷口感染豬鏈球菌后主要引起腦膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥和鏈球菌中毒性休克綜合征（STSS）等癥狀。目前，對于豬鏈球菌2型致病機制，尤其是豬鏈球菌2型在人血中如何逃逸補體介導(dǎo)的吞噬殺傷研究還不是很清楚。 補體作為天然免疫防御中的一個重要成分，是保護(hù)宿主免受外來病原體入侵的一個有力武器。補體激活是一種高度有序的級聯(lián)反應(yīng)，宿主體內(nèi)補體激活有三條途徑：經(jīng)典途徑；甘露糖結(jié)合凝集素途徑；替代途徑。這三條途徑都形成C3轉(zhuǎn)化酶，裂解C3產(chǎn)生活性補體成分C3b，大量的C3b分子與病原體結(jié)合是補體活化中的重要事件。大部分能夠引起侵襲性疾病的病原菌都得益于通過直接抑制C3b或招募H因子（human Factor H，hFH）來抑制其表面C3b的沉積和功能，進(jìn)而抑制補體系統(tǒng)的活化和補體受體介導(dǎo)的吞噬。 實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)豬鏈球菌2型毒力因子表面蛋白Fhb（factor H-bindingprotein），能夠招募人血清中的補體負(fù)調(diào)節(jié)子hFH，抑制補體替代途徑的活化，從而增強豬鏈球菌在血中存...

【文章來源】： 安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【文章目錄】：
縮略語表
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 豬鏈球菌概述
    1.2 豬鏈球菌 2 型毒力因子
        1.2.1 莢膜多糖（CPS）
        1.2.2 溶菌酶釋放蛋白（MRP）和胞外因子（EF）
        1.2.3 溶血素（SLY）
        1.2.4 腺苷合成酶 （Ssads）
        1.2.5 H 因子結(jié)合蛋白（Fhb）
    1.3 本研究的目的及意義
第一部分 與補體組分蛋白相互作用的 Fhb 蛋白結(jié)構(gòu)域的確定
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 載體和菌株
            1.1.2 主要試劑和材料
            1.1.3 主要儀器和設(shè)備
        1.2 實驗方法
            1.2.1 引物設(shè)計
            1.2.2 截短表達(dá)片段和敲除結(jié)構(gòu)域片段重組質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.2.3 重組菌的誘導(dǎo)表達(dá)
            1.2.4 重組蛋白的表達(dá)純化
            1.2.5 正常健康人血清的制備
            1.2.6 生物素標(biāo)記蛋白
            1.2.7 ELISA 檢測 Fhb 截短片段和敲除結(jié)構(gòu)域片段與補體 蛋白 hFH，C3b，C3d 的結(jié)合
            1.2.8 配體印跡驗證 Fhb 截短片段與補體蛋白 hFH，C3b， C3d 的結(jié)合
            1.2.9 生物膜干涉（Biolayer Interferometry，BLI）分析重組 Fhb 截短片段與補體蛋白 hFH，C3b，C3d 的結(jié)合
    2 結(jié)果
        2.1 重組 Fhb 截短表達(dá)片段Ⅰ^Ⅵ質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
        2.2 Fhb 截短片段Ⅰ^Ⅵ重組蛋白的表達(dá)純化
        2.3 Fhb 截短表達(dá)片段Ⅲ*重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
        2.4 重組蛋白 His-Fhb-Ⅲ*的表達(dá)和純化
        2.5 Fhb 敲除結(jié)構(gòu)域蛋白重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
        2.6 Fhb 敲除結(jié)構(gòu)域重組蛋白的表達(dá)純化
        2.7 重組 Fhb 截短結(jié)構(gòu)域 His-Fhb-Ⅲ*與補體蛋白 hFH，C3b 和 C3d 的結(jié)合
            2.7.1 Fhb 截短結(jié)構(gòu)域 His-Fhb-Ⅲ*特異性結(jié)合補體組分蛋白 hFH
            2.7.2 重組 Fhb 截短結(jié)構(gòu)域 His-Fhb-Ⅲ*特異性結(jié)合補體組分蛋白 C3b 和 C3d
    3 討論
第二部分 表面蛋白 Fhb 功能結(jié)構(gòu)域Ⅲ*參與豬鏈球菌抑制補體激活的作用
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗菌株
            1.1.2 實驗材料和試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 實驗方法
            1.2.1 CΔSsfhb-3 基因缺失互補株的構(gòu)建
            1.2.2 Fhb 蛋白在豬鏈球菌中的定位
            1.2.3 上清蛋白 Fhb 對豬鏈球菌表面 C3b/iC3b 沉積的影響
            1.2.4 重組蛋白 Fhb 結(jié)構(gòu)Ⅲ*對豬鏈球菌表面 C3b/iC3b 沉積的影響
    2 結(jié)果
        2.1 Ssfhb-3 上下游片段的擴增及與 pEASY^TM-Blunt Zero 載體的連接和鑒定
        2.2 Ssfhb-3 基因與 pAT18 載體的連接和鑒定
        2.3 缺失互補株 CΔSsfhb-3 的鑒定
        2.4 Fhb 蛋白在豬鏈球菌中的定位
        2.5 上清蛋白 Fhb 對豬鏈球菌表面 C3b/iC3b 沉積的影響
        2.6 Fhb 功能結(jié)構(gòu)域Ⅲ*能夠抑制豬鏈球菌表面 C3b/iC3b 的沉積
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ
附錄Ⅱ
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬鏈球菌2型毒力因子部分片段的克隆與表達(dá) [J]. 徐淑菲,何孔旺,陸承平.  中國人獸共患病雜志. 2004(11)
[2]豬鏈球菌2型溶菌酶釋放蛋白的黏附作用 [J]. 曾巧英,陸承平.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2002(04)

碩士論文
[1]2型豬鏈球菌表面蛋白Hp0272參與逃逸宿主天然免疫的分子機制研究[D]. 甘淑珍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué). 2012



本文編號：3555674