【目的】利用已建立的雞朊蛋白過表達和抑制表達DF-1細胞系,通過與正常DF-1細胞系在細胞粘附、侵襲、增殖和凋亡方面的比較,探究雞朊蛋白對DF-1細胞的影響;檢測朊蛋白過表達和抑制表達DF-1細胞與正常DF-1細胞抗凋亡相關(guān)基因CK2和Bcl-2的RNA表達量變化,采用CK2抑制劑鹽酸米托蒽醌阻斷凋亡相關(guān)信號轉(zhuǎn)導途徑Wnt/β-catenin來闡明朊蛋白過表達以及抑制表達影響DF-1細胞的分子機制,為進一步了解雞朊蛋白的生理功能和禽源細胞腫瘤發(fā)生機制研究提供理論依據(jù)�！痉椒ā浚�1）根據(jù)Gen Bank中雞CK2、Bcl-2和β-actin基因序列各設計一對引物,經(jīng)過反應條件優(yōu)化,建立Ch CK2和Ch Bcl-2 m RNA的反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測方法;將傳代穩(wěn)定后收集的DF-1-Pr P、DF-1和DPs3-5細胞提取其總RNA,以熒光定量RT-PCR法檢測3種細胞的CK2和Bcl-2 m RNA表達量差異。（2）在DF-1-Pr P、DF-1和DPs3-5細胞中加入不同濃度鹽酸米托蒽醌作用后,以細胞MTT法（噻唑藍）、流式細胞術(shù)、粘附試驗和侵襲試驗等方法檢測朊蛋白與CK2對3種細... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
縮寫詞英漢對照表
第一章 緒論
    1 朊蛋白的構(gòu)象和朊病毒毒株
        1.1 朊蛋白的錯誤折疊和聚合
        1.2 朊病毒的毒性
        1.3 PrPC的抗凋亡活性
    2 CK2和Bcl-2 基因及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導通路的研究進展
        2.1 Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導通路研究進展
        2.2 NF-κB信號轉(zhuǎn)導途徑研究進展
        2.3 CK2的功能
            2.3.1 CK2在胚胎發(fā)育中的作用
            2.3.2 CK2在配子形成過程中的作用
            2.3.3 CK2在組織器官中的作用
            2.3.4 CK2在癌癥中的作用
            2.3.5 CK2抑制劑
    3 研究目的及意義
    4 研究內(nèi)容和方法
        4.1 雞CK2和Bcl-2 基因mRNA的SYBR Green Ⅰ實時定量RT-PCR檢測法建立
        4.2 鹽酸米托蒽醌對雞朊蛋白過表達及抑制表達DF-1 細胞增殖和凋亡的影響
第二章 雞CK2和Bcl-2 基因的SYBR Green Ⅰ 實時定量檢測法建立
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 細胞與菌株
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 方法
            1.2.1 細胞總RNA的提取
            1.2.2 引物設計
            1.2.3 cDNA合成與RT-PCR擴增
            1.2.4 標準質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.2.5 標準曲線的繪制
            1.2.6 CK2和Bcl-2 基因表達量的熒光定量RT-PCR檢測與數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 電泳檢測PCR擴增產(chǎn)物與陽性質(zhì)粒的鑒定
        2.2 標準曲線的建立
        2.3 不同DF-1 細胞CK2和Bcl-2 基因的表達量
    3 討論
第三章 米托蒽醌對雞朊蛋白過表達和抑制表達DF-1 細胞的影響
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 細胞
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 方法
            1.2.1 細胞培養(yǎng)
            1.2.2 粘附試驗
            1.2.3 侵襲試驗
            1.2.4 細胞增殖和凋亡檢測
                1.2.4.1 MTT法檢測細胞增殖
                1.2.4.2 流式細胞儀檢測細胞凋亡
            1.2.5 不同鹽酸米托蒽醌濃度下PrPC的表達量檢測
    2 結(jié)果與分析
        2.1 米托蒽醌以劑量依賴方式抑制DF-1 細胞粘附
        2.2 米托蒽醌以劑量依賴方式抑制DF-1 細胞侵襲
        2.3 米托蒽醌以劑量和時間依賴方式抑制DF-1 細胞增殖
        2.4 米托蒽醌以劑量依賴方式促進DF-1 細胞凋亡
        2.5 不同米托蒽醌濃度下PrPC基因的表達量分析
    3 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介


【參考文獻】：
博士論文
[1]雞朊蛋白參與DF-1細胞增殖粘附的功能研究[D]. 刁小龍.甘肅農(nóng)業(yè)大學 2013



本文編號：3555077