IFN-τ屬于Ⅰ型干擾素,只在反芻動(dòng)物的胚胎滋養(yǎng)層中分泌,作為反芻動(dòng)物妊娠的識(shí)別信號,具備Ⅰ型干擾素功能,還有獨(dú)特的抗黃體溶解及低細(xì)胞毒性特點(diǎn),已逐漸成為研究熱點(diǎn)。它作為一種旁分泌因子與子宮內(nèi)膜的受體結(jié)合,發(fā)揮重要的生物學(xué)功能,其中包括對Ⅰ類組織相容性復(fù)合體分子(MHC-I)的免疫調(diào)節(jié)。先前的研究已表明在羊上皮細(xì)胞中IFN-τ能夠促進(jìn)MHC-I的表達(dá),但I(xiàn)FN-τ調(diào)控奶牛Ⅰ類組織相容性復(fù)合體分子(BoLA-I)的免疫機(jī)制目前尚未見報(bào)道�；贗FN-τ的免疫調(diào)控報(bào)道較少,本試驗(yàn)首先采用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬細(xì)胞和建立小鼠急性肺損傷模型探索IFN-τ的抗炎機(jī)制;然后通過添加不同濃度的IFN-τ刺激奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞,尋找IFN-τ的最佳作用濃度;選取最佳濃度的IFN-τ刺激奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞,采用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測及分析差異表達(dá)的miRNAs與BoLA-I的潛在靶向關(guān)系,利用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證靶基因,并對其進(jìn)行功能研究。闡明IFN-τ調(diào)節(jié)奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞表達(dá)BoLA-I的分子機(jī)制,為提升奶牛繁殖力提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。1.IFN-τ的抗炎機(jī)制研究IFN-τ屬...

【文章來源】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表( ABBREVIATIONS)
第1章 文獻(xiàn)綜述
    前言
    1 IFN-τ的生物學(xué)研究進(jìn)展
        1.1 IFN-τ是Ⅰ型干擾素
        1.2 IFN-τ基因結(jié)構(gòu)及其多態(tài)性
        1.3 FN-τ在妊娠識(shí)別中的作用
        1.4 IFN-τ抗病毒活性
        1.5 IFN-τ炎性免疫功能
    2 Ⅰ類MHC分子功能的研究進(jìn)展
        2.1 MHC-I分子呈遞抗原經(jīng)典作用
        2.2 MHC-I分子的非經(jīng)典作用機(jī)制
    3 TLR受體在炎性免疫中的研究進(jìn)展
    4 miRNAs研究進(jìn)展
        4.1 miRNA的生物學(xué)特性
        4.2 miRNA的功能
        4.3 miRNA的作用機(jī)制
    5 Fps-SHP-2通路與BoLA-I分子的關(guān)系
    6 研究的目的與意義
第2章 IFN-τ的抗炎機(jī)制研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備
            2.1.2 試驗(yàn)主要試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 肺炎模型的建立
            2.2.2 肺組織病理切片試驗(yàn)
            2.2.3 肺水腫試驗(yàn)
            2.2.4 肺組織MPO活力試驗(yàn)
            2.2.5 qRT-PCR
            2.2.6 ELISA試驗(yàn)
            2.2.7 Western blot
    3 結(jié)果
        3.1 IFN-τ對LPS引起肺損傷的影響
        3.2 IFN-τ對肺組織干濕比及MPO活力的影響
        3.3 IFN-τ對促炎因子表達(dá)的影響
        3.4 IFN-τ對NF-κB信號通路的影響
        3.5 IFN-τ對MAPK信號通路的影響
    4 討論
第3章 IFN-τ調(diào)控BoLA-I表達(dá)的miRNA文庫分析及驗(yàn)證
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備:參考第二章
            2.1.2 主要試劑配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定及處理
            2.2.2 MTT試驗(yàn)
            2.2.3 miRNA和基因表達(dá)量分析
            2.2.4 蛋白表達(dá)量分析:參考第2章Western blot方法
            2.2.5 miRNA模擬物和抑制劑的轉(zhuǎn)染試驗(yàn)
            2.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因分析
    3 結(jié)果
        3.1 IFN-τ濃度選擇
        3.2 細(xì)胞鑒定及IFN-τ對BoLA-I heavy chain和miRNA表達(dá)的影響
        3.3 bta-miR-148b/152靶基因的鑒定
        3.4 bta-miR-148b/152與BoLA-I heavy chain呈負(fù)相關(guān)關(guān)系
    4 討論
        4.1 IFN-τ對BoLA-I分子表達(dá)的影響
        4.2 bta-miR-148b/152對BoLA-I heavy chain表達(dá)的影響
第4章 bta-miR-148b/152在牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中的靶基因功能研究
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料及設(shè)備
        1.2 試驗(yàn)方法
            1.2.1 ELISA、qPCR、Western blot、RNA干擾和免疫熒光技術(shù)
    2 結(jié)果
        2.1 LPS對BoLA-I分子表達(dá)的影響
        2.2 bta-miR-148b/152介導(dǎo)BoLA-I heavy chain影響炎性因子表達(dá)
        2.3 BoLA-I分子對TLR4及其下游分子的影響
        2.4 BoLA-I heavy chain敲除對LPS誘導(dǎo)炎性反應(yīng)的影響
        2.5 BoLA-I heavy chain敲除對TLR4路徑的影響
        2.6 交聯(lián)的BoLA-I對LPS誘導(dǎo)炎性反應(yīng)的影響
    3 討論
        3.1 BoLA-I分子對病原菌的影響
        3.2 BoLA-I分子對TLR4信號通路的影響
        3.3 BoLA-I分子對Fps-SHP-2通路的影響
第5章 全文結(jié)論
    1 本研究的主要結(jié)論
    2 本研究不足之處與進(jìn)一步工作建議
參考文獻(xiàn)
附錄一 載體構(gòu)建序列信息
附錄二 前期及相關(guān)研究
附錄三 個(gè)人簡歷
致謝



本文編號：3554886