長(zhǎng)期以來(lái)人工授精、精液冷凍保存和體外受精等動(dòng)物繁殖技術(shù)對(duì)優(yōu)良家畜牛、豬、羊和馬的快速繁殖和品種改良發(fā)揮了重要作用,且對(duì)拯救瀕危動(dòng)物以及解決人類(lèi)的不孕癥亦都具有重要意義。廣西是水牛養(yǎng)殖大省,隨著農(nóng)業(yè)機(jī)械化水平提高,水牛役用性價(jià)值逐年向肉用性和乳用性調(diào)整,廣西水牛的品種改良也是水牛生產(chǎn)最重要的環(huán)節(jié)之一。水牛精液采集生產(chǎn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn),一些公牛個(gè)體的精子活率較低,無(wú)法用于水牛品種的雜交與改良。目前對(duì)有關(guān)影響水牛精子活率的基因及其調(diào)控機(jī)制研究較少,本研究在已有小鼠、人、牛等動(dòng)物精子活率相關(guān)研究的基礎(chǔ)上,初步研究了 PHB、CAPZB、TEKT2基因表達(dá)與水牛精子活率的關(guān)系。研究結(jié)果為進(jìn)一步闡明這些基因在水牛精子發(fā)生過(guò)程中的作用及其對(duì)水牛精子活率的影響奠定了基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:水牛PHB、CAPZB和TEKT2基因克隆與分析:以水牛睪丸組織為材料,參考黃牛相關(guān)基因序列,設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增引物,采用RT-PCR方法擴(kuò)增獲得了水牛PHB、CAPZB和TEKT2基因編碼區(qū)片段。對(duì)克隆片段進(jìn)行測(cè)序并分析,結(jié)果顯示,水�；騊HB 948 bp,包含819bp的ORF區(qū),編碼272個(gè)氨基酸;CAPZB基因958b... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：167 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２哺乳動(dòng)物精子結(jié)構(gòu)示意圖??Ａ圖：哺乳動(dòng)物精子尾部中段橫截面示意圖｜２Ｉ｜；?Ｂ圖哺乳動(dòng)物精子示意

Ｆｉｇ．?３?Ｔｈｅ?ｍａｊｏｒ?ｓｉｇｎａｌ?ｐａｔｈｓ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?ｓｐｅｒｍ?ｍｏｔｉｏｎ??總之至少有兩類(lèi)不同的鈣離子通路存在：其中一條是不依賴于ＣａＭ?（例如??ｓＡＣ／ＰＫＡ），而另一條貝丨Ｊ相反（圖３）。艮Ｐ鈣離子可以在兩個(gè)地方發(fā)揮作用于同一??條通路。因?yàn)椋螅粒没虻娜笔?huì)引起精子活動(dòng)力喪失，因此ｓＡＣ功能的缺失是??不能由鈣調(diào)蛋白（ＣａＭ）代償?shù)摹５且灿袑?shí)驗(yàn)表明，當(dāng)ＣａＭ被抑制時(shí)，精子??運(yùn)動(dòng)可以被回復(fù)（通過(guò)促進(jìn)ＰＫＡ通路），因此ｓＡＣ這條通路上鈣調(diào)蛋白（ＣａＭ）??的缺失可以由ｓＡＣ通路的成份代償。??ＣａＭ的下游靶標(biāo)是鈣調(diào)蛋白激酶（ＣａＭＫ）。各種ＣａＭＫ亞型存在哺乳動(dòng)物??精子上。抑制ＣａＭＫ，精子的運(yùn)動(dòng)能力會(huì)降低［４６］。因此ＣａＭ很有可能是通過(guò)鞭??毛上一個(gè)或多個(gè)ＣａＭＫ亞型來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)精子運(yùn)動(dòng)的影響（圖３）。??２＿３．３精子運(yùn)動(dòng)的能量代謝??２．３．３．１糖的攝取??大家都知道

?２０??１．２．３．２?ＰＣＲ擴(kuò)增程序??擴(kuò)增采用降落ＰＣＲ進(jìn)行，根據(jù)圖３－１所示設(shè)置反應(yīng)條件［１４７］。??９５ＴＣ９５Ｔ；?９５Ｘ：?９５?Ｘ：?９５］Ｃ?９ＳＴ：??７２Ｘ；?３０ｓ?７２Ｘ：／３〇Ｓ?３０ｓ?３０＊??＾１５０Ｓ?ｗ－?－?＾??３０ｓ?１５ＳＸ？??３０ｓ??ｌ?Ｉ?ｔ?Ｊ?＼?Ｉ?＼?Ｉ?＼???３?ｃｙｃｌｅ?３?ｃｙｃｌｅ?１５?ｃｙｃｌｅ?１５?ｃｙｃｌｅ??圖３－１降落ＰＣＲ反應(yīng)條件??Ｆｉｇ?３－１?Ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｐｒｏｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ?ＰＣＲ??１．２．３．３?ＰＣＲ產(chǎn)物鑒定??將得到的ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物以０．８％瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。（用１％?ＥＢ染色，??凝膠成像系統(tǒng)對(duì)圖像進(jìn)行分析）［１４７］。??１．２．４目的片段膠回收、ＴＡ克隆及鑒定??對(duì)于目的片段膠的回收、ＴＡ克隆及鑒定均參考本實(shí)驗(yàn)室相關(guān)做法。??１．２．４．１目的片段膠回收??根據(jù)從北京天根生物公司購(gòu)買(mǎi)的瓊脂糖凝膠回收試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行膠回收，??操作步驟如下：首先平衡吸附柱（將５００ｐＬ平衡液ＢＬ加入吸附柱中，１２０００ｒｐｍ??離心ｌｍｉｎ，收集管的液體棄掉，把吸附柱放回收集管中），接下來(lái)在紫外線下用??刀片把符合預(yù)期大小的條帶小心切割下來(lái)，裝入一個(gè)干凈的１．５ｍＬＥＰ管中，稱??取重量（注：〇．ｌｇ對(duì)應(yīng)１〇〇此膠塊融化液），然后將３倍膠體積的溶膠液ＰＮ加??２６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的分子克隆[J]. 姜宏,李麓蕓,盧光琇.  生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào). 2001(04)
[2]精子的運(yùn)動(dòng)[J]. 岳煥勛,孟珊珊,黃明孔.  男性學(xué)雜志. 1993(01)

博士論文
[1]BMP1基因在動(dòng)物卵泡發(fā)生過(guò)程中的表達(dá)模式及功能的初步研究[D]. 雷小燦.廣西大學(xué) 2015

碩士論文
[1]水牛、豬GCNF和SF-1基因克隆與表達(dá)規(guī)律的初步研究[D]. 蘇節(jié).廣西大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3552304