以鴨胚尿囊腔途徑增殖鴨腺病毒,24-120 h死亡鴨胚和120 h后未死亡鴨胚置4℃冰箱過(guò)夜,無(wú)菌操作分別收集尿囊液。對(duì)鴨腺病毒連續(xù)傳代,選擇傳代穩(wěn)定的鴨胚尿囊液作為種毒,種毒鴨胚半數(shù)感染量為10-751/0.2ml, HA價(jià)1：216。用種毒制備疫苗抗原,加0.3%甲醛、37℃滅活48 h,加蜂膠佐劑,制備鴨腺病毒蜂膠滅活苗,蜂膠最終含量10mg/ml,疫苗安全檢驗(yàn)合格。建立了間接ELISA法檢測(cè)鴨腺病毒抗體。ELISA最佳反應(yīng)條件為：鴨腺病毒抗原包被濃度2.45μg/ml,血清稀釋倍數(shù)1：100,作用時(shí)間90 min。HRP-羊抗鴨IgG稀釋度為1:2000。用32份陰性血清測(cè)得臨界值為0.2310。建立的ELISA方法重復(fù)性好,板內(nèi)變異系數(shù)1.09%-2.67%,板間變異系數(shù)2.79-4.06%,均小于10%。建立的方法與大腸桿菌、多殺性巴氏桿菌、鴨瘟病毒、鴨肝炎病毒、沙門氏菌陽(yáng)性血清無(wú)交叉反應(yīng),特異性好。用制備的鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫實(shí)驗(yàn)鴨,以間接ELISA和血凝抑制試驗(yàn)監(jiān)測(cè)免疫鴨抗體消長(zhǎng)規(guī)律。ELISA結(jié)果顯示：一次免疫組種鴨免疫后第3d就可在血清中檢測(cè)到血清呈陽(yáng)性,第14... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 鴨腺病毒研究現(xiàn)狀
        1.1 鴨腺病毒在腺病毒中的分類地位
        1.2 鴨腺病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.3 鴨腺病毒基因組結(jié)構(gòu)和功能
        1.4 鴨腺病毒理化性質(zhì)
        1.5 鴨腺病毒感染禽類引起的疾病
            1.5.1 雞減蛋綜合征
            1.5.2 鴨腺病毒病
        1.6 檢測(cè)鴨腺病毒感染的方法
            1.6.1 病原分離鑒定
            1.6.2 血清學(xué)方法
            1.6.3 分子生物學(xué)方法
    2 蜂膠及其應(yīng)用
        2.1 蜂膠
            2.1.1 蜂膠的免疫佐劑作用
            2.1.2 蜂膠佐劑提高體液免疫功能
            2.1.3 蜂膠佐劑提高細(xì)胞免疫功能
            2.1.4 蜂膠對(duì)免疫器官的作用
            2.1.5 蜂膠的安全性
        2.2 蜂膠佐劑的應(yīng)用
    3 選題目的
第二章 鴨腺病毒蜂膠滅活苗的研制及其免疫原性研究
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)毒株
        1.2 參考毒(菌)株
        1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 主要試驗(yàn)試劑及配方
            1.4.1 血凝及血凝抑制試驗(yàn)試劑
            1.4.2 ELISA試驗(yàn)試劑
            1.4.3 MTT試驗(yàn)試劑
        1.5 試驗(yàn)儀器
        1.6 其他試驗(yàn)材料
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 研制鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗
            2.1.1 制備種毒
            2.1.2 制備蜂膠滅活苗
        2.2 檢測(cè)鴨腺病毒抗體的間接ELISA方法的建立
            2.2.1 抗原的制備與純化
            2.2.2 陰性血清制備
            2.2.3 陰性鴨IgG的提取
            2.2.4 酶標(biāo)二抗最佳稀釋度的確定
            2.2.5 抗原和血清最佳稀釋度的確定
            2.2.6 血清最佳作用時(shí)間的確定
            2.2.7 鴨腺病毒陰性血清臨界值的確定
            2.2.8 間接ELISA操作程序
            2.2.9 特異性試驗(yàn)
            2.2.10 敏感性試驗(yàn)
            2.2.11 重復(fù)性試驗(yàn)
        2.3 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫種鴨及免疫應(yīng)答監(jiān)測(cè)
            2.3.1 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫種鴨
            2.3.2 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫實(shí)驗(yàn)鴨的抗體監(jiān)測(cè)
            2.3.3 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫實(shí)驗(yàn)鴨的細(xì)胞免疫監(jiān)測(cè)
    3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.1 研制鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗
            3.1.1 測(cè)定半數(shù)感染量(EID_(50))
            3.1.2 種毒檢驗(yàn)
            3.1.3 蜂膠含量測(cè)定
            3.1.4 疫苗性狀、疫苗的無(wú)菌檢驗(yàn)和安全性檢驗(yàn)
        3.2 檢測(cè)鴨腺病毒抗體的間接ELISA方法的建立
            3.2.1 抗原制備與純化
            3.2.2 陰性血清制備
            3.2.3 陰性鴨IgG的提取
            3.2.4 HRP-羊抗鴨IgG最佳稀釋度
            3.2.5 抗原和血清最佳稀釋度
            3.2.6 血清最佳作用時(shí)間
            3.2.7 鴨腺病毒陰性血清臨界值
            3.2.8 特異性試驗(yàn)結(jié)果
            3.2.9 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
            3.2.10 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        3.3 鴨腺病毒蜂膠滅活疫苗免疫種鴨及免疫應(yīng)答監(jiān)測(cè)
            3.3.1 種鴨免疫后血清抗體ELISA效價(jià)測(cè)定
            3.3.2 種鴨免疫后血清抗體血凝抑制(HI)效價(jià)測(cè)定
            3.3.3 鴨淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果
            3.3.4 白細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
    4 討論
        4.1 疫苗的研制
        4.2 間接ELISA方法的建立
            4.2.1 抗原的純化
            4.2.2 抗原和血清稀釋度
            4.2.3 酶標(biāo)二抗?jié)舛鹊拇_定
            4.2.4 臨界值的確定
        4.3 疫苗對(duì)種鴨體液免疫的影響
            4.3.1 間接ELISA試驗(yàn)
            4.3.2 血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)
        4.4 疫苗對(duì)種鴨細(xì)胞免疫的影響
            4.4.1 疫苗對(duì)鴨外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化效果的影響(MTT法)
            4.4.2 白細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
    5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3551173