豬肉品質(zhì)作為豬育種工作中的重要經(jīng)濟(jì)性狀之一,已經(jīng)成為育種工作者關(guān)注的重點(diǎn)。眾所周知,脂肪性狀是影響豬肉品質(zhì)的重要因素,對(duì)其進(jìn)行深入研究將有助于我們找到改善豬肉品質(zhì)的方法。為此,本試驗(yàn)對(duì)影響脂肪性狀的兩個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了初步研究,以揭開(kāi)其轉(zhuǎn)錄調(diào)控原理的面紗,為下一步的研究奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)主要從以下幾個(gè)方面對(duì)DECR1基因和GPR81基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了研究：（1）通過(guò)QT-PCR技術(shù)對(duì)GPR81基因在大白豬的各個(gè)組織表達(dá)情況進(jìn)行定量研究,得出GPR81基因在脂肪、肝臟以及腎臟組織中高表達(dá),其中脂肪組織中表達(dá)量最高,其他組織中微量表達(dá)或不表達(dá)。（2）通過(guò)NCBI和EBI數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)得到DECR1、GPR81基因5’端上游大約2000bp的調(diào)控序列,并對(duì)其進(jìn)行PCR克隆,分別獲得2099bp、1798bp的序列。利用生物信息學(xué)技術(shù)分別對(duì)這兩個(gè)基因的5’端上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域進(jìn)行了預(yù)測(cè)分析,發(fā)現(xiàn)DECR1基因5’端上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域內(nèi)存在AP1、SP1、MZF1等多種常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。對(duì)CpG島分布情況分析,發(fā)現(xiàn)沒(méi)有CpG島存在；在GPR81基因5’端上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域發(fā)現(xiàn)有GATA-... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用中英文縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
    2 真核生物基因轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
        2.1 轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)及分類(lèi)
        2.2 轉(zhuǎn)錄因子的研究方法
        2.3 利用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)錄因子的預(yù)測(cè)
    3 真核生物基因啟動(dòng)子的研究
    4 DECR1基因的研究進(jìn)展
    5 GPR81基因的研究進(jìn)展
    6 研究的目的及意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要的生化試劑和藥品
        1.2 細(xì)胞、菌株和載體及豬基因組DNA
        1.3 試劑盒
        1.4 組織表達(dá)譜分析的樣品
        1.5 主要的儀器、設(shè)備及耗材
        1.6 緩沖液和常用試劑的配制
        1.7 主要的生物學(xué)軟件和網(wǎng)站
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 豬GPR81基因組織表達(dá)譜分析
        2.2 豬DECR1基因和GPR81基因5'端上游調(diào)控區(qū)域的克隆和生物信息學(xué)分析
        2.3 豬DECR1基因和GPR81基因近端啟動(dòng)子缺失分析
        2.4 進(jìn)一步對(duì)DECR1和GPR81基因啟動(dòng)子進(jìn)行缺失載體的構(gòu)建
        2.5 定點(diǎn)突變的驗(yàn)證試驗(yàn)
        2.6 超表達(dá)實(shí)驗(yàn)對(duì)DECR1基因和GPR81基因5’端上游調(diào)控區(qū)域轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分析鑒定
        2.7 siRNA對(duì)DECR1基因5’端上游調(diào)控區(qū)域轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    1 豬GPR81基因組織表達(dá)譜分析
        1.1 組織總RNA的提取
        1.2 反轉(zhuǎn)錄的cDNA結(jié)果檢測(cè)
        1.3 豬GPR81基因在豬不同組織中的表達(dá)結(jié)果
    2 豬DECR1和GPR81基因5'端上游調(diào)控區(qū)域的克隆和生物信息學(xué)分析
        2.1 豬DECR1和GPR81基因5'端上游調(diào)控區(qū)域的克隆
        2.2 豬DECR1和GPR81基因5'端上游調(diào)控區(qū)域的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)
    3 豬DECR1基因和GPR81基因近端啟動(dòng)子缺失分析
        3.1 豬DECR1、GPR81基因啟動(dòng)子不同缺失片段的構(gòu)建
        3.2 DECR1和GPR81基因啟動(dòng)子缺失片段在不同細(xì)胞中活性分析
        3.3 第二次對(duì)DECR1和GPR81基因啟動(dòng)子進(jìn)行缺失載體的構(gòu)建
        3.4 DECR1和GPR81基因的第二次構(gòu)建的缺失片段的活性分析
    4 DECR1基因、GPR81基因定點(diǎn)突變分析鑒定
    5 超表達(dá)實(shí)驗(yàn)對(duì)DECR1和GPR81基因5'UTR轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分析
        5.1 豬GATA1基因CDS全長(zhǎng)的克隆及雙酶切鑒定
        5.2 超表達(dá)SP1對(duì)DECR1基因5'UTR轉(zhuǎn)錄活性的分析鑒定
        5.3 超表達(dá)豬的GATA1轉(zhuǎn)錄因子對(duì)GPR81基因啟動(dòng)子活性的影響
        5.4 豬PPARγ2基因的超表達(dá)對(duì)GPR81基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響
    6 SIRNA對(duì)DECR1基因5’端上游調(diào)控區(qū)域轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分析
第四章 討論
    1 豬DECR1基因的分析討論
        1.1 豬DECR1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域生物信息學(xué)分析與討論
        1.2 豬DECR1基因轉(zhuǎn)錄因子SP1的討論
    2 豬GPR81基因的分析討論
        2.1 豬GPR81基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域生物信息學(xué)分析與討論
        2.2 豬GPR81基因組織表達(dá)譜分析討論
        2.3 豬GPR81基因轉(zhuǎn)錄因子PPARγ2的分析討論
第五章 小結(jié)
    1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
    2 下一步計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3547762