UL14蛋白是馬立克氏病病毒（Marek’s Disease Virus, MDV）所編碼的一種被膜蛋白,在皰疹病毒家族中是高度同源的。雖然UL14的基因編碼區(qū)域與UL13有重疊,但重疊區(qū)域只編碼長度可變、高度不保守的C端,高度同源的基因序列分布在不重疊的區(qū)域。在1型單純皰疹病毒（Herpes simplex virus1, HSV1）中,UL14不僅具有抗細(xì)胞凋亡的作用還具有熱休克蛋白（Host shock protein, HSP）的功能并可以調(diào)節(jié)病毒的復(fù)制。馬立克氏病（Marek’s Disease, MD）是由MDV引起的一種雞的高度接觸、傳染性的惡性腫瘤性疾病,能夠引起內(nèi)臟和皮膚腫瘤,侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng),是禽類重要的腫瘤性疾病之一。MD是研究腫瘤性疾病理想的動物模型。本研究應(yīng)用基因芯片技術(shù)和熒光定量PCR方法檢測MDV感染過程中UL14基因的動力學(xué)變化,發(fā)現(xiàn)UL14呈現(xiàn)顯著的差異表達(dá),且超強(qiáng)毒株RB1B與疫苗株CVI988的UL14表達(dá)表現(xiàn)不同的動力學(xué)變化。1.馬立克氏病病毒基因在雞胸腺組織中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)圖譜MDV是一種高度細(xì)胞結(jié)合性、致腫瘤性α皰疹病毒,以引起T細(xì)胞瘤為特征。通... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
符號說明
文獻(xiàn)綜述
    綜述一 馬立克氏病與馬立克氏病病毒的研究進(jìn)展
        1. MID的演變
        2. MDV在體內(nèi)的感染過程
        3. MD感染水平的影響因素
        4. MDV的致病因子與致病機(jī)理
        5. 宿主的抗感染免疫應(yīng)答
        6. MD疫苗的使用和MDV病毒的進(jìn)化
        7. 遺傳育種
    綜述二 UL14蛋白的研究進(jìn)展
        1. UL14蛋白對病毒復(fù)制的影響
        2. UL14蛋白調(diào)節(jié)病毒被膜和衣殼結(jié)構(gòu)蛋白的核轉(zhuǎn)位功能
        3. UL14蛋白的類熱休克蛋白功能
        4. UL14蛋白的抗凋亡作用
研究內(nèi)容 一 馬立克氏病病毒基因在雞胸腺組織中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    摘要
    1. 材料
        1.1 病毒、實(shí)驗(yàn)動物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2. 方法
        2.1 動物實(shí)驗(yàn)
        2.2 總RNA的提取
        2.3 總RNA純化
        2.4 樣品RNA的放大和標(biāo)記
        2.5 芯片雜交
        2.6 結(jié)果掃描
        2.7 UL14基因分析
    3. 結(jié)果
        3.1 MDV基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)圖譜
        3.2 UL14基因分析結(jié)果
    4. 討論
研究內(nèi)容二 UL14蛋白的原核表達(dá)及多抗血清的制備
    摘要
    1. 材料
        1.1 菌株、病毒與細(xì)胞
        1.2 試劑與載體
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 主要培養(yǎng)基與試劑的配制
        1.5 主要儀器
        1.6 引物的設(shè)計(jì)合成
    2. 方法
        2.1 目的基因UL14的擴(kuò)增
        2.2 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        2.3 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.4 目的片段與pGEM-T-easy載體的連接轉(zhuǎn)化
        2.5 重組質(zhì)粒pGEM-T-UL14的篩選與鑒定
        2.6 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.7 UL14蛋白的原核表達(dá)
        2.8 融合蛋白的純化
        2.9 SDS-PAGE電泳及Western blot分析
        2.10 制備抗UL14多抗血清
        2.11 IFA鑒定抗UL14多抗血清的反應(yīng)性
    3. 結(jié)果
        3.1 UL14基因的擴(kuò)增與鑒定
        3.2 重組質(zhì)粒pET-32a-UL14的酶切鑒定
        3.3 融合蛋白的表達(dá)
        3.4 融合蛋白的純化及Western blot分析
        3.5 IFA和Western blot檢測多抗血清的反應(yīng)性
    4. 討論
研究內(nèi)容三 UL14在馬立克氏病病毒感染CEF細(xì)胞及雞組織內(nèi)的變化規(guī)律
    摘要
    1. 材料
        1.1 病毒、細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動物
        1.2 主要試劑
        1.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.4 主要儀器
    2. 方法
        2.1 總RNA的提取
        2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的建立
        2.3 感染細(xì)胞中基因水平的檢測
        2.4 Western blot檢測感染細(xì)胞中蛋白水平的變化
        2.5 不同感染組織中基因表達(dá)水平檢測
    3. 結(jié)果
        3.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的特異性
        3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的重復(fù)性
        3.3 CEF細(xì)胞中基因表達(dá)水平
        3.4 MDV感染的CEF細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平
        3.5 不同感染組織中基因表達(dá)水平
    4. 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3539478