在2019年1月-2019年6月對云南出現(xiàn)呼吸道疫病的57個雞場進(jìn)行H9亞型禽流感檢測的基礎(chǔ)上,選取石林和楚雄2個H9亞型禽流感陽性樣品進(jìn)行病毒分離。從分離的H9N2亞型禽流感病毒感染雞胚尿囊液中提取總RNA,采用特異性引物經(jīng)反轉(zhuǎn)錄PCR分別擴(kuò)增HA和NA基因,PCR產(chǎn)物純化后進(jìn)行測序。序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果表明,云南2株H9N2毒株HA基因核苷酸序列同源性為94.2%,NA基因核苷酸序列同源性為93.6%,系統(tǒng)進(jìn)化分析表明云南H9N2亞型禽流感病毒HA和NA基因均屬于歐亞譜系中的類ADKHKY28097分支（Y280-like）,ACKYN12019和ACKYN72019 HA基因之間的同源性為94.3%,與參考毒株ACKJX2448的同源性最高,為95.6%～98.5%,與中國流行的H9N2代表株和疫苗株同源性較低。HA蛋白333-340位裂解位點為PSRSSR↓GLF,具有低致病性禽流感病毒分子特征,受體結(jié)合位點均發(fā)生E198T和Q234L的突變,具有人樣受體結(jié)合特征,在29、141、298、305、313、492位氨基酸有6個糖基化位點。ACKYN12019和ACKYN72... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(03)北大核心

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H9亞型禽流感病毒反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增結(jié)果

用測序引物(H9F/HR和N2F/N2R)通過反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增,獲得ACKYN12019和ACKYN72019兩個毒株HA和NA基因,基因片段大小分別為1 687和1 402 bp(圖2),與預(yù)期結(jié)果吻合。產(chǎn)物通過凝膠純化、回收目的基因進(jìn)行測序。2.4 HA基因遺傳進(jìn)化分析

云南2019年2株H9N2毒株與參考毒株進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,結(jié)果表明ACKYN12019和ACKYN72019毒株屬于歐亞系中的Y280-like(ADKHKY28097)分支,與華東經(jīng)典毒株ACKZJFSQ2011、華中經(jīng)典毒株ACKAHWBQ2011同屬于一個分支(圖5)。圖4 H9N2 AIV HA基因氨基酸同源性分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3539371