新城疫（Newcastle Disease, ND）由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus, NDV）引1起,可致多種禽類死亡,給我國(guó)及世界養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的損失。NDV為副黏病毒科,禽腮腺炎病毒屬,單股負(fù)鏈RNA病毒,并且具有囊膜。其基因組結(jié)構(gòu)為3’-NP-P-M-F-HN-L-5’,分別對(duì)應(yīng)編碼六種病毒結(jié)構(gòu)蛋白。病毒感染細(xì)胞后各種各樣的免疫信號(hào)通路被激活,并產(chǎn)生抗病毒免疫反應(yīng)和炎性反應(yīng)來(lái)對(duì)抗病毒感染。模式識(shí)別受體（PRRs）中的RIG-Ⅰ樣受體（RLR）是細(xì)胞質(zhì)中一類RNA解旋酶,它們可以通過(guò)其對(duì)NA配體結(jié)合病原相關(guān)分子模式（PAMP）,識(shí)別非自身的病毒RNA。被感染的細(xì)胞中,這種相互作用可以通過(guò)觸發(fā)RLRs及包括MAVS在內(nèi)的其下游信號(hào)分子的活化,最終導(dǎo)致一型干擾素（IFN）的產(chǎn)生和炎性因子的產(chǎn)生,細(xì)胞做出抗病毒免疫應(yīng)答.然而,很多病毒通過(guò)保護(hù)自身RNA不被識(shí)別,或靶向RLR信號(hào)通路中的信號(hào)分子等作用,以逃避細(xì)胞的先天性免疫應(yīng)答。本研究通過(guò)檢測(cè)NDV對(duì)MAVS的影響,來(lái)研究NDV對(duì)RLR信號(hào)通路的免疫逃避機(jī)制。一、NDV感染細(xì)胞誘導(dǎo)MAVS降解本研究分別使用... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
第一章 文獻(xiàn)綜述及背景
    1 NDV研究背景簡(jiǎn)介
    2 RIG-I樣受體信號(hào)通路及其調(diào)控研究進(jìn)展
        2.1 RLRs介導(dǎo)的抗病毒信號(hào)通路
        2.2 RLRs介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)
        2.3 RLR通路的泛素化
        2.4 病毒干擾RLRs介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)
        2.5 NLRs對(duì)RLR信號(hào)通路的影響
        2.6 總結(jié)
第二章 NDV感染細(xì)胞誘導(dǎo)MAVS的降解
    1 材料和方法
        1.1 毒株和細(xì)胞系
        1.2 試劑和儀器
        1.3 Herts/33、ZJ1、La Sota感染HeLa或A549細(xì)胞
        1.4 UV滅活NDV
        1.5 樣品的Western Blot分析
        1.6 細(xì)胞總RNA的提取(Trizol法)及Real-time PCR
    2 結(jié)果和分析
        2.1 Herts/33感染HeLa和A549細(xì)胞
        2.2 ZJ1和La Sota感染HeLa細(xì)胞
        2.3 UV滅活的Herts/33不能誘導(dǎo)MAVS的降解和IFN-β的產(chǎn)生
    3 討論
第三章 NDV通過(guò)PCBP2非依賴途徑誘導(dǎo)MAVS降解
    1 材料和方法
        1.1 毒株和細(xì)胞系
        1.2 載體及分子生物學(xué)相關(guān)試劑
        1.3 試劑和儀器
        1.4 Herts/33、ZJ1、La Sota、GFP-NDV感染HeLa或A549細(xì)胞
        1.5 細(xì)胞內(nèi)PCBP2的干擾
        1.6 HA-PCBP2真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.7 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞
    2 結(jié)果與分析
        2.1 Herts/33感染HeLa和A549細(xì)胞
        2.2 ZJ1和La Sota感染HeLa細(xì)胞
        2.3 PCBP2干擾條件的摸索
        2.4 敲低PCBP2之后對(duì)細(xì)胞內(nèi)病毒復(fù)制的影響
        2.5 HA-PCBP2真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.6 轉(zhuǎn)染PCBP2對(duì)MAVS的影響
    3 討論
第四章 NDV通過(guò)蛋白酶體途徑誘導(dǎo)MAVS的降解
    1 材料與方法
        1.1 細(xì)胞與毒株
        1.2 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)抑制劑
        1.3 試劑和儀器
        1.4 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)抑制劑處理細(xì)胞
        1.5 TCID50(病毒感染力)的測(cè)定
        1.6 細(xì)胞總RNA的提取(Trizol法)及Real-time PCR
    2 結(jié)果與分析
        2.1 泛素-蛋白酶體抑制劑的選擇
        2.2 MG132處理后對(duì)病毒滴度的影響
    3 討論
第五章 NDV病毒蛋白對(duì)MAVS降解的檢測(cè)
    1 材料與方法
        1.1 質(zhì)粒和細(xì)胞
        1.2 載體及分子生物學(xué)相關(guān)試劑
        1.3 ZJ1 HA-P/W、Flag-V真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞
    2 結(jié)果與分析
        2.1 HA-P/W、Flag-V真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2 轉(zhuǎn)染Flag-P/M/NP、HA-P/W后MAVS表達(dá)水平的變化
        2.3 轉(zhuǎn)染Flag-ZJ V后MAVS表達(dá)水平的變化
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]病毒感染引發(fā)天然免疫細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究進(jìn)展[J]. 孫文香,蔣爭(zhēng)凡.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2013(05)
[2]蛋白酶體及其抑制劑的研究進(jìn)展[J]. 李明,繆澤鴻,丁健.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2008(05)



本文編號(hào)：3536504