賈第鞭毛蟲是一種常見的腸道原蟲,其宿主范圍非常廣泛,可引起包括人在內的多種哺乳動物腹瀉,主要通過食物和水傳播。賈第鞭毛蟲病呈世界性分布,自20世紀70年代以來,世界各地常有賈第鞭毛蟲病的流行與暴發(fā),因賈第蟲病曾在國際旅游者中流行,故被稱為“旅游者腹瀉”,現(xiàn)己列為全世界危害人類健康的10種主要寄生蟲病之一。隨著社會的不斷發(fā)展,人與動物的關系越來越緊密,直接接觸或間接接觸的不斷增多,一些家畜、伴侶動物和野生動物作為該原蟲的保蟲宿主對人類衛(wèi)生健康的潛在威脅日漸增長。目前,國內對于賈第鞭毛蟲的檢測多為形態(tài)觀察或基于PCR擴增的檢測方法,前者漏檢率較高,后者對于儀器的精密度要求較為嚴格,成本較高且用時長。本文利用環(huán)介導等溫擴增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）技術建立了特異,高效、成本低廉的檢測賈第鞭毛蟲的方法,并加以應用。1.通過形態(tài)學觀察和PCR檢測方法鑒定了犬賈第鞭毛蟲,利用PCR擴增了賈第鞭毛蟲的磷酸丙糖異構酶基因（Triose phosphate isomerase, TPI）和p-賈第素基因（β-giardin）,并將其克隆入... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略表
前言
第一篇 文獻綜述
    第一章 賈第鞭毛蟲病及其病原的檢測
        1 病原
        2 流行因素
            2.1 社會因素
            2.2 自然因素
        3 檢測賈第鞭毛蟲的方法
            3.1 病原學診斷
            3.2 免疫學診斷
            3.3 分子生物學診斷
        4 磷酸丙糖異構酶基因(TPI基因)
        5 β-賈第素基因(β-giardin基因)
        參考文獻
    第二章 環(huán)介導等溫擴增技術(LAMP)的研究進展
        1 環(huán)介導等溫擴增技術(LAMP)
            1.1 環(huán)介導等溫擴增技術的特點
            1.2 環(huán)介導等溫擴增技術的作用原理
        2 環(huán)介導等溫擴增技術的應用
        3 展望
        參考文獻
第二篇 試驗研究
    第三章 賈第鞭毛蟲的分離與鑒定
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 顯微觀察
            2.2 PCR擴增
        3 討論
        參考文獻
    第四章 基于TPI基因LAMP檢測方法的建立
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 LAMP擴增
            2.2 常規(guī)PCR擴增
            2.3 EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切鑒定
            2.4 測序結果分析
            2.5 LAMP反應與PCR反應敏感性對比結果
            2.6 LAMP反應特異性結果
        3 討論
        參考文獻
    第五章 基于β-giardin基因LAMP檢測方法的建立
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 LAMP擴增
            2.2 常規(guī)PCR擴增
            2.3 EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切鑒定
            2.4 測序結果分析
            2.5 LAMP反應與PCR反應敏感性對比結果
            2.6 LAMP反應特異性結果
        3 討論
        參考文獻
    第六章 LAMP檢測方法的應用
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 鏡檢
            2.2 常規(guī)PCR檢測
            2.3 LAMP檢測
        3 討論
        參考文獻
全文總結
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]犬賈第蟲巢式PCR檢測方法的建立[J]. 李棕松,高珺珊,翟濤,吳威,宮鵬濤,李建華,楊舉,李赫,張國才,張西臣.  中國生物制品學雜志. 2013(11)
[2]猴痘病毒LAMP檢測方法的研究[J]. 呂沁風,鄭偉,吳忠華,羅鵬,何蕾,徐琦,李禾.  中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2013(05)
[3]藍氏賈第鞭毛蟲檢測技術研究進展[J]. 鄧明俊,肖西志,孫濤,孫敏,鄭小龍,王群,張曉文,孫明君,朱來華.  動物醫(yī)學進展. 2012(12)
[4]LAMP（環(huán)介導等溫擴增）的原理及在寄生蟲檢測上的應用[J]. 史亞東,趙子方,朱丹,張龍現(xiàn),寧長申,菅復春.  中國人獸共患病學報. 2011(10)
[5]豬圓環(huán)病毒2型環(huán)介導等溫擴增（LAMP）檢測方法的研究[J]. 何逸民,鄒國秋,張得玉,羅玉均,曹宗喜,何冉婭,秦宏陽,孔留五,張桂紅.  中國獸醫(yī)雜志. 2009(12)
[6]用PCR擴增tim基因檢測藍氏賈第鞭毛蟲[J]. 丁慧萍,盧思奇,戎煜,李鳳舞,王鳳云.  寄生蟲與醫(yī)學昆蟲學報. 2002(02)
[7]犬賈第蟲包囊的分離與鑒定[J]. 何宏軒,張西臣,喻建軍,陳建寶.  中國獸醫(yī)寄生蟲病. 2002(02)
[8]藍氏賈第蟲分離株tim基因序列分析比較研究（英文）[J]. 盧思奇,文建凡,李繼紅,王鳳云.  Chinese Medical Journal. 2002(01)
[9]鼠賈第鞭毛蟲中β賈第蟲素的研究[J]. 何宏軒.  國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊). 2000(05)
[10]應用染色體DNA探針檢測藍氏賈第鞭毛蟲[J]. 諸欣平.  國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊). 1991(04)

碩士論文
[1]東北地區(qū)部分兒童及奶牛中隱孢子蟲和賈第蟲感染的分子流行病學調查[D]. 蘇艷.吉林大學 2011
[2]四川省部分地區(qū)犬賈第蟲和隱孢子蟲分子遺傳特征及其種系發(fā)育研究[D]. 胡霖.四川農業(yè)大學 2011
[3]河南省部分地區(qū)羊賈第蟲病流行病學調查以及分離株分子特征研究[D]. 張開放.河南農業(yè)大學 2011



本文編號：3535144