日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是一種單股正鏈RNA病毒,可以引起公豬睪丸炎和母豬流產(chǎn),是一種人畜共患病病毒,蚊子叮咬帶毒豬后可將病毒傳播給人。JEV主要蛋白有核心蛋白C,膜蛋白PrM/M和囊膜蛋白E,以及（NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5）七個非結(jié)構(gòu)蛋白。NS2A基因在翻譯過程中會因為核糖體-1移碼產(chǎn)生衍生物,與NS1蛋白C端融合,產(chǎn)生NS1’蛋白。JEV致弱株SA14-14-2由于NS2A基因的66位核苷酸由G變?yōu)锳,無法形成核糖體移碼所需的結(jié)構(gòu),因此失去了產(chǎn)生NS1’的能力。理論上NS1’抗體是JEV野毒感染的特征指標。本研究利用人工合成的純度為95%的NS1’44aa建立檢測豬日本腦炎病毒抗體的間接ELISA方法,并對華東地區(qū)2013年的豬群進行血清流行病學調(diào)查。同時,根據(jù)臨床檢測數(shù)據(jù)和實驗室動物模型對NS1’多肽的檢測對象進行分析,通過基因重組技術(shù)獲得重組EDⅢ和Cap串聯(lián)蛋白,利用制備的EDⅢ多克隆抗體和Cap多克隆抗體對串聯(lián)蛋白進行鑒定。發(fā)現(xiàn)其與Cap蛋白存在交叉表位。具體內(nèi)容如下：1.檢測豬血... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻綜述
    第一章 日本腦炎病毒NS1’蛋白的研究進展
        1 概況
            1.1 乙腦病毒
            1.2 乙腦流行情況
            1.3 流行病學
            1.4 致病機制
            1.5 臨床癥狀
            1.6 損傷
            1.7 診斷
            1.8 免疫
            1.9 防控措施
        2 病毒基因組及病毒蛋白
            2.1 病毒基因組
            2.2 病毒的生命周期
            2.3 病毒結(jié)構(gòu)蛋白
            2.4 病毒非結(jié)構(gòu)蛋白
        3 流行病學調(diào)查
            3.1 分子流行病學調(diào)查
            3.2 血清流行病學調(diào)查
        參考文獻
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 檢測豬血清中日本腦炎病毒移碼蛋白抗體的間接ELISA檢測方法的建立與應用
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 間接ELISA方法反應條件優(yōu)化
            2.2 豬乙腦血清流行病學調(diào)查
        3 討論
        參考文獻
    第二章 日本腦炎病毒核心蛋白基因與EDⅢ基因串聯(lián)表達與鑒定
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 Cap基因擴增
            2.2 重組質(zhì)粒pET32a-Cap-a雙酶切鑒定
            2.3 重組質(zhì)粒pET32a-Cap-b雙酶切鑒定
            2.4 重組質(zhì)粒pET32a-Cap-a及pET32a-Cap-b序列測定
            2.5 重組Cap-a蛋白及重組Cap-b蛋白的SDS-PAGE電泳結(jié)果
            2.6 重組Cap-b蛋白的可溶性鑒定
            2.7 重組Cap-b蛋白的純化
            2.8 Cap多克隆抗體的純化
            2.9 IFA鑒定Cap多克隆抗體
            2.10 重組EDⅢ蛋白的誘導及可溶性鑒定
            2.11 重組EDⅢ蛋白的純化
            2.12 切膠制備的EDⅢ免疫原
            2.13 EDⅢ多克隆抗體的純化
            2.14 IFA鑒定EDⅢ多克隆抗體
            2.15 EDⅢ-Cap基因擴增
            2.16 重組質(zhì)粒pET28a-EDⅢ-Cap雙酶切鑒定
            2.17 EDⅢ-Cap基因序列測定
            2.18 重組EDⅢ-Cap蛋白的SDS-PAGE電泳結(jié)果
            2.19 重組EDⅢ-Cap蛋白的一步復性純化
            2.20 重組EDⅢ-Cap蛋白的WB鑒定
        3 討論
        參考文獻
    第三章 日本腦炎病毒NS1’蛋白與核心蛋白交叉表位的分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 NS1’間接ELISA方法與商品化試劑盒的符合率試驗
            2.2 NS1’間接ELISA檢測方法在小鼠模型上的檢測效果
            2.3 NS1’44a多肽的同源性分析結(jié)果
            2.4 Cap蛋白與NS1’潛在交叉表位的實驗驗證
        3 討論
        參考文獻
全文總結(jié)
附錄 常用試劑的配制
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]西尼羅河病毒病競爭ELISA檢測方法的初步建立及應用[J]. 常娓娓,王淑娟,吳曉東,劉華雷,趙永剛,王志亮.  中國動物檢疫. 2011(09)
[2]豬乙腦RT-PCR快速診斷方法的建立[J]. 馮永勝,江科,衣服德.  山東畜牧獸醫(yī). 2011(05)
[3]豬乙型腦炎間接ELISA與血凝抑制試驗方法的比較[J]. 賈杏林,陳煥春,王祥,何啟蓋,吳斌.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(02)
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[7]檢測豬乙型腦炎病毒抗體間接ELISA方法的建立與應用[J]. 沈婷,周斌,陳溥言.  畜牧與獸醫(yī). 2010(04)
[8]乙腦病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的原核表達及重組蛋白間接ELISA方法的初步建立[J]. 吳鵬,曹瑞斌,周斌,張羽,沈婷,陳溥言.  畜牧與獸醫(yī). 2010(03)
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博士論文
[1]乙型腦炎病毒分子流行病學、診斷及重組疫苗研究[D]. 劉昊.吉林大學 2013

碩士論文
[1]豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒的研制及豬源乙型腦炎病毒的分離鑒定[D]. 黃少梅.華中農(nóng)業(yè)大學 2013
[2]乙型腦炎病毒雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的建立與應用[D]. 梅力.華中農(nóng)業(yè)大學 2012
[3]豬流行性乙型腦炎病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒的研究[D]. 鐘澤棟.四川農(nóng)業(yè)大學 2012
[4]豬流行性乙型腦炎雙抗夾心ELISA方法的建立與試劑盒的制備[D]. 張寧.吉林大學 2011
[5]豬乙型腦炎病毒RT-PCR檢測方法的建立及乙腦病毒四川分離株P(guān)rM/E基因的序列分析[D]. 王偉杰.四川農(nóng)業(yè)大學 2010
[6]豬乙型腦炎病毒檢測方法的建立[D]. 崔奕杰.河北農(nóng)業(yè)大學 2006



本文編號：3534459