為探究某動物園西部白眉長臂猿死亡的可能原因,無菌采集病死白眉長臂猿肺臟組織進行細菌分離鑒定。通過分離純化、培養(yǎng)特性觀察、革蘭染色鏡檢、生化試驗以及16S rDNA克隆測定對分離菌株進行鑒定;進一步研究分離株的致病性、耐藥性,并進行超廣譜β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因檢測及測序分析。結(jié)果表明,分離得到1株革蘭陰性小桿菌,命名為J181121,該分離菌的培養(yǎng)及生化特性符合支氣管敗血波氏桿菌,其16S rDNA基因序列與Genbank中支氣管敗血波氏桿菌（登錄號:CP018761.1）的同源性為99%,對小鼠致病力強。藥敏試驗結(jié)果顯示,分離株對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥,PCR檢測到超廣譜β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因bla-SHV。 

【文章來源】：西北農(nóng)業(yè)學報. 2020,29(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

圖1 分離株在TSA(A)、MAC(B)培養(yǎng)基上的生長特性及分離株的革蘭染色鏡檢結(jié)果(C)

采用引物16S rDNA-P1/P2擴增分離株16S rDNA基因序列,產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測,在1 500 bp左右有1條特異性擴增條帶(圖2),產(chǎn)物測序后經(jīng)BLAST比對分析,結(jié)果顯示分離株的16S rDNA基因序列與Genbank中支氣管波氏桿菌的同源性為99%,將所得的分離株命名為J181121。進一步選取具有代表性的同屬不同種的副百日咳波氏桿菌(B. parapertussis)、來源不同的支氣管敗血波氏桿菌等14株菌株與分離株構(gòu)建16S rDNA系統(tǒng)進化樹(圖3)。從所建進化樹模型可見,分離株J181121與支氣管敗血波氏桿菌(登錄號:CP018761.1)位于同一進化分支上,同源性為99%。結(jié)合菌落特點、細菌形態(tài)及培養(yǎng)特性、生化試驗鑒定,判定分離株為支氣管敗血波氏桿菌。2.4 分離株J181121藥敏試驗

對所得分離菌株進行 β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、氟喹諾酮類、氯霉素類藥物的敏感性檢測,結(jié)果顯示分離菌對 β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥(表3)。表3 分離菌株J181121藥敏試驗結(jié)果Table 3 Antimicrobial susceptible tests of isolate J181121 藥物名稱Drug 判定標準 Assessment criteria 抑菌圈直徑/mmDiameter of inhibition zone 結(jié)果判定Result determination R I S 頭孢唑林Cefazolin ≤14 15～17 ≥18 6 R 頭孢噻吩Cefalotin ≤14 15～17 ≥18 6 R 頭孢呋辛Cefuroxime ≤14 15～17 ≥18 6 R 頭孢曲松Ceftriaxone ≤13 14～20 ≥21 19 I 頭孢噻肟Cefotaxime ≤14 15～22 ≥23 8 R 頭孢吡肟Cefepime ≤14 15～17 ≥18 22 S 氨芐西林Ampicilin ≤13 14～16 ≥17 7 R 阿莫西林Amoxicillin ≤13 14～17 ≥18 6 R 亞胺培南Imipenem ≤13 14～15 ≥16 19 S 慶大霉素Gentamycin ≤12 13～14 ≥15 18 S 卡那霉素Kanamycin ≤13 14～17 ≥18 22 S 妥布霉素Tobramycin ≤12 13～14 ≥15 16 S 四環(huán)素Tetracycline ≤11 12～14 ≥15 28 S 環(huán)丙沙星Ciprofloxacin ≤15 16～20 ≥21 22 S 左氧氟沙星Levifloxacin ≤13 14～16 ≥17 29 S 諾氟沙星Norfloxacin ≤12 13～16 ≥17 22 S 加替沙星Gatifloxacin ≤14 15～17 ≥18 23 S 氯霉素Chloramphenicol ≤12 13～17 ≥18 24 S 注:S. 敏感; I. 中介; R. 耐藥。Note: S.Susceptible; I.Intermediate; R.Resistant.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]SHVβ-內(nèi)酰胺酶的研究進展[J]. 潘紅,黃靜芳,杜文嬌.  江蘇預防醫(yī)學. 2018(05)
[2]兔支氣管敗血波氏桿菌的分離鑒定及耐藥性分析[J]. 牛江婷,方詞,伊淑帥,張雙,何羽揚,董國英,胡桂學.  中國獸藥雜志. 2018(02)
[3]豬支氣管敗血波氏桿菌生物被膜態(tài)和常規(guī)培養(yǎng)比較蛋白組學分析[J]. 寧建剛,高翔,肖敏,馮娜,溫峰琴,包世俊,邢小勇,胡永浩.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報. 2018(01)
[4]云南高黎貢山東白眉長臂猿鳴聲聲譜研究[J]. 李旭,周偉,彭超,李云臣.  河南師范大學學報(自然科學版). 2017(02)
[5]豬支氣管敗血波氏桿菌的分離鑒定及部分生物學特性的研究[J]. 諸明欣,張煥容,張斌,徐鳳.  中國獸醫(yī)科學. 2017(03)
[6]中國長臂猿科動物種群監(jiān)測現(xiàn)狀分析[J]. 管振華,閻璐,黃蓓.  四川動物. 2017(02)
[7]白眉長臂猿感染戊型肝炎病毒的病理學觀察[J]. 安俊卿,戴榕全,湯金,盧巖,佘銳萍,田紀景,石蕊寒,常玲玲,張成林.  野生動物學報. 2017(01)
[8]高黎貢山赧亢東白眉長臂猿活動區(qū)秋季潛在可選果實食物研究[J]. 李明會,周偉,李柳,李正波.  林業(yè)調(diào)查規(guī)劃. 2016(06)
[9]幼齡白眉長臂猿的人工撫育初探[J]. 滕萍.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2016(11)
[10]SHV型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的研究進展[J]. 張玲,黃永茂.  國際檢驗醫(yī)學雜志. 2016(07)



本文編號：3532973