本研究以布魯菌Rev.1株基因組為模板,擴(kuò)增BAB基因序列,將其克隆至原核表達(dá)載體pET-30a（+）,獲得重組質(zhì)粒pET-30a-BAB,對重組質(zhì)粒進(jìn)行原核表達(dá),經(jīng)Western blotting檢測后,利用表達(dá)產(chǎn)物構(gòu)建檢測布魯菌病的間接ELISA方法。結(jié)果表明,本試驗(yàn)成功克隆并表達(dá)了BAB基因,純化表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析顯示,本研究獲得較純的重組BAB蛋白;Western blotting試驗(yàn)表明,表達(dá)蛋白可與布魯菌羊陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng),具有良好的反應(yīng)原性;以重組BAB蛋白作為包被抗原,建立并優(yōu)化了檢測BAB抗體的間接ELISA方法。確定最佳包被條件:BAB蛋白包被量0.25μg/mL,血清稀釋度為1∶400;封閉液為3%豬源明膠;二抗稀釋度為1∶6 000;顯色時間為10 min。應(yīng)用建立方法對臨床40份羊血清進(jìn)行檢測,計(jì)算得出臨界值為0.607。即當(dāng)待檢血清的P/N≥1.5,且D_{450 nm}≥0.607時,判定為陽性,當(dāng)D_{450 nm}≤0.561時,判定為陰性,當(dāng)0.607<D_{450 nm}<... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

方陣法試驗(yàn)結(jié)果

抗原抗體反應(yīng)時間的確定

TMB顯色液稀釋倍數(shù)的確定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]羊布魯氏菌病4種血清學(xué)檢測方法的臨床應(yīng)用比較[J]. 藺旭光,史量全,李佳怡,郭雙,張榮榮,白皓丞,李天旭,劉鍇.  中國微生態(tài)學(xué)雜志. 2018(04)
[2]布魯菌病診療專家共識[J]. 張文宏,張躍新.  中華傳染病雜志. 2017 (12)
[3]牛病毒性腹瀉病毒抗原捕獲ELISA方法的建立[J]. 范晴,謝芝勛,謝志勤,劉加波,龐耀珊,鄧顯文,謝麗基,羅思思.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2015(02)
[4]布魯菌病患者外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞亞群的變化[J]. 賈宇臣,其其格,郭菊紅,趙海珍,烏云,奧敦托婭.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志(電子版). 2014(05)
[5]布魯氏菌病實(shí)驗(yàn)室診斷方法的研究進(jìn)展[J]. 王秀麗,蔣玉文,毛開榮,丁家波,王秋菊,何宇,彭小兵.  中國獸藥雜志. 2011(11)
[6]動物布魯氏菌病防治研究進(jìn)展[J]. 毛開榮.  中國獸藥雜志. 2003(09)

博士論文
[1]流產(chǎn)布魯菌BABRS22915與BABRS27735基因定向缺失株的構(gòu)建及生物學(xué)特性的研究[D]. 鮑衍清.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017

碩士論文
[1]宿主Prdx6與生殖系統(tǒng)相關(guān)細(xì)胞內(nèi)布魯氏菌寄生關(guān)系的研究[D]. 翟菲菲.吉林大學(xué) 2019



本文編號：3531495