本研究以布魯菌Rev.1株基因組為模板,擴(kuò)增BAB基因序列,將其克隆至原核表達(dá)載體pET-30a（+）,獲得重組質(zhì)粒pET-30a-BAB,對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行原核表達(dá),經(jīng)Western blotting檢測(cè)后,利用表達(dá)產(chǎn)物構(gòu)建檢測(cè)布魯菌病的間接ELISA方法。結(jié)果表明,本試驗(yàn)成功克隆并表達(dá)了BAB基因,純化表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析顯示,本研究獲得較純的重組BAB蛋白;Western blotting試驗(yàn)表明,表達(dá)蛋白可與布魯菌羊陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng),具有良好的反應(yīng)原性;以重組BAB蛋白作為包被抗原,建立并優(yōu)化了檢測(cè)BAB抗體的間接ELISA方法。確定最佳包被條件:BAB蛋白包被量0.25μg/mL,血清稀釋度為1∶400;封閉液為3%豬源明膠;二抗稀釋度為1∶6 000;顯色時(shí)間為10 min。應(yīng)用建立方法對(duì)臨床40份羊血清進(jìn)行檢測(cè),計(jì)算得出臨界值為0.607。即當(dāng)待檢血清的P/N≥1.5,且D_{450 nm}≥0.607時(shí),判定為陽(yáng)性,當(dāng)D_{450 nm}≤0.561時(shí),判定為陰性,當(dāng)0.607<D_{450 nm}<... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(11)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【部分圖文】：

方陣法試驗(yàn)結(jié)果

抗原抗體反應(yīng)時(shí)間的確定

TMB顯色液稀釋倍數(shù)的確定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]宿主Prdx6與生殖系統(tǒng)相關(guān)細(xì)胞內(nèi)布魯氏菌寄生關(guān)系的研究[D]. 翟菲菲.吉林大學(xué) 2019



本文編號(hào)：3531495