狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）引起的一種急性、接觸性、高致死率人畜共患傳染病。該病主要侵害機(jī)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central nervous system,CNS）。它可以分為狂躁型和麻痹型兩種,其中以狂躁、恐水及流涎等臨床癥狀為代表的狂躁型狂犬病最為常見。RABV幾乎能夠感染所有溫血?jiǎng)游?呈世界性流行,一旦發(fā)病,其死亡率高達(dá)100%。迄今為止,狂犬病仍然是影響全球公共衛(wèi)生安全的因素之一,它不僅每年引起60,000左右的人死亡,而且給全世界造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。暴露前后的免疫接種是預(yù)防和控制狂犬病的主要措施,但是近些年來,對(duì)犬的管理放松了警惕、流浪犬以及野生動(dòng)物的入侵,使狂犬病再度流行。RABV的致病機(jī)制尚不清楚,且對(duì)犬的RABV街毒株模型研究甚少,嚴(yán)重的制約了ⅠRABV致病機(jī)理研究以及新型疫苗的研制與開發(fā)。因此,亟需建立規(guī)范可靠、可重復(fù)的犬的狂犬病感染模型。鑒于此,本試驗(yàn)通過使用中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所涂長春研究員分離到的狂犬病街毒（Zhu et al2011）接種6周齡的比格犬,飼養(yǎng)觀察3個(gè)月,建立犬的感染模型,并對(duì)此模型進(jìn)行評(píng)價(jià)研究。... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 狂犬病概況
    1.2 狂犬病流行概況
        1.2.1 國外狂犬病流行概況
        1.2.2 國內(nèi)狂犬病流行概況
    1.3 狂犬病診斷
        1.3.1 狂犬病的臨床診斷
        1.3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷
            1.3.2.1 狂犬病抗原檢測(cè)
            1.3.2.2 RABV分子生物學(xué)檢測(cè)
        1.3.3 血清學(xué)診斷
    1.4 小鼠及犬狂犬病的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)展
    1.5 研究課題的目的與意義
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞與毒株
        2.1.2 試劑及藥品
        2.1.3 培養(yǎng)基的配置
        2.1.4 主要緩沖液及相關(guān)試劑的配置
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.6 本實(shí)驗(yàn)中所用到的引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 病毒增殖
            2.2.1.1 狂犬病病毒街毒株DRV-SX-09擴(kuò)增
            2.2.1.2 CVS-11細(xì)胞毒的擴(kuò)增
        2.2.2 病毒滴定
            2.2.2.1 小鼠顱內(nèi)接種DRV-SX-09病毒滴定
            2.2.2.2 CVS-11滴度的測(cè)定
        2.2.3 犬唾液的采集及處理
        2.2.4 唾液總RNA的提取及RT-PCR擴(kuò)增目的片段
            2.2.4.1 總RNA提取
            2.2.4.2 PCR靈敏度分析鑒定
            2.2.4.3 RT-PCR
        2.2.5 N基因全長擴(kuò)增
        2.2.6 酶切產(chǎn)物的回收
        2.2.7 N基因片段與載體pET-42b的連接體反應(yīng)
        2.2.8 連接體系的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 質(zhì)粒的小量提取
        2.2.10 質(zhì)粒酶切鑒定
        2.2.11 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及樣品采集
            2.2.11.1 攻毒前動(dòng)物預(yù)處理
            2.2.11.2 實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.11.3 犬血液的采集
            2.2.11.4 犬腦脊液的采集
            2.2.11.5 比格犬腦組織的獲取
            2.2.11.6 唾液腺(舌下腺)的獲取
            2.2.11.7 其他器官的獲取
        2.2.12 病理切片制作
            2.2.12.1 取材
            2.2.12.2 犬腦的固定
            2.2.12.3 脫水、透明及包埋
            2.2.12.4 切片制備
            2.2.12.5 染色和封片
        2.2.13 免疫組化
        2.2.14 熒光抗體中和試驗(yàn)檢測(cè)犬血清及腦脊液中和抗體
        2.2.15 本實(shí)驗(yàn)所用的儀器設(shè)備
        2.2.16 試驗(yàn)廢物的處理
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 陽性質(zhì)粒的構(gòu)建及檢測(cè)引物PCR靈敏度鑒定分析
        3.1.1 狂犬病病毒街毒株DRV-SX-09 N基因序列的擴(kuò)增
        3.1.2 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
        3.1.3 檢測(cè)引物的鑒定
        3.1.4 PCR靈敏度檢測(cè)分析
    3.2 狂犬病病毒街毒株DRV-SX-09小鼠MICLD_(50)的測(cè)定
    3.3 比格犬感染RABV的臨床表現(xiàn)
    3.4 犬的唾液排毒情況檢測(cè)
    3.5 犬的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果
    3.6 犬的腦脊液常規(guī)檢測(cè)
    3.7 犬的腦脊液和血清的中和抗體水平
    3.8 犬體內(nèi)病毒分布情況
    3.9 犬腦組織的病理檢測(cè)結(jié)果
    3.10 免疫組化法檢測(cè)病毒的分布
第4章 討論
    4.1 發(fā)病犬唾液排毒情況的鑒定分析
    4.2 病毒在發(fā)病犬體內(nèi)分布情況
    4.3 犬發(fā)病前后中和抗體水平分析
    4.4 發(fā)病前后血液和腦脊液生化分析
    4.5 發(fā)病犬的腦組織病理學(xué)分析
    4.6 發(fā)病犬腦內(nèi)病毒的分布情況分析
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3523695