從上海某羊養(yǎng)殖場獲得了一株單核細(xì)胞增生李斯特菌分離株CMG47。為了確定該單核細(xì)胞增生李斯特菌分離株的分子分型,了解其生物學(xué)特性,本研究通過多重PCR對該菌株進(jìn)行譜系和血清型分析,利用多位點(diǎn)序列分型（MLST）方法鑒定其分子分型。采用PCR方法對主要毒力基因進(jìn)行檢測,并通過體外觀察和熒光定量PCR對菌株溶脂溶血特性進(jìn)行分析。將菌株通過腹腔注射ICR小鼠和靜脈注射斑馬魚,測定其毒力。研究結(jié)果表明該分離株屬于譜系Ⅰ,1/2b血清型;序列分型為ST619;攜帶prfA、inlA、inlB、plcA、plcB、mpl、actA、hly等主要毒力因子;體外無明顯溶脂活性,溶血活性較弱;小鼠和斑馬魚試驗(yàn)均顯示,該分離株屬于強(qiáng)毒株,與強(qiáng)毒參考株EGDe的毒力相當(dāng)（P>0.05）。該分離株的譜系/血清型為引起李斯特菌病的主要型別,擁有整套主要毒力因子,為單增李斯特菌強(qiáng)毒株。本研究為李斯特菌病散發(fā)病例的流行和傳播特征分析提供了分子生物學(xué)基礎(chǔ),對建立健全李斯特菌監(jiān)測體系和風(fēng)險評估意義重大。 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2020,51(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

圖1 分離株CMG47譜系和血清型的多重PCR鑒定結(jié)果

為探明分離株CMG47毒力的分子基礎(chǔ),對參考菌株EGDe和分離株CMG47的主要毒力基因、內(nèi)化素基因以及應(yīng)激調(diào)控基因(prfA-plcA-hly-mpl-plcB-actA-inlA-inlB-sigB)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示,分離株CMG47中含有LIPI-1的完整毒力基因,包含6個主要毒力基因actA、hly、mpl、plcA、plcB和prfA ,兩個內(nèi)化素基因inlA和inlB以及應(yīng)激調(diào)控基因sigB(圖2),表明分離株CMG47具有潛在致病性和侵襲性。2.4 分離株生長特性分析

與參考菌株EGDe相比,分離株CMG47在12 h內(nèi)的生長趨勢和生長速度與參考株相當(dāng)(圖3),未見顯著性差異(P>0.05),提示分離株具有正常的生長能力。2.5 分離株溶血和溶脂特性分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山羊單增李斯特桿菌病的診斷與防治[J]. 唐慕德,溫宇婷,吳青青,阿依江·阿比提,伍鋼,KASSIM ALIBAKAR,鄧秋純,劉犇,鄭文亞.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(10)
[2]北京市西城區(qū)食源性與臨床感染性單核細(xì)胞增生李斯特菌PFGE和MLST分型研究[J]. 霍哲,王晨,徐俊,高波,曹瑋.  中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2017(09)
[3]杭州地區(qū)單核細(xì)胞增生李斯特菌食品分離株分子型別研究[J]. 俞驊,潘勁草,汪皓秋,斯國靜,劉濤,樓秀芹,張蔚,嚴(yán)杰.  中國人獸共患病學(xué)報. 2017(03)
[4]北京市人源性單核細(xì)胞增生李斯特菌耐藥特征及分子分型研究[J]. 王麗麗,陳倩.  中國食品衛(wèi)生雜志. 2016(04)
[5]單增李斯特菌膜裂解相關(guān)基因缺失突變株的構(gòu)建及生物學(xué)特性鑒定[J]. 江玲麗,高有領(lǐng),周向陽,白帆,方春,錢國英,方維煥.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2016(04)
[6]3例單增李斯特菌感染的病原學(xué)、臨床及流行病學(xué)特征分析[J]. 王紅,王艷,張正東,陳曦,鄧建平,肖波,劉祥,王斌,文海,范暉,葉長蕓,李群.  中國人獸共患病學(xué)報. 2015(07)
[7]單核細(xì)胞增多性李斯特菌弱毒株的生物學(xué)特性鑒定[J]. 江玲麗,陳健舜,李愛云,萬婧,周向陽,錢國英,李彩燕,方維煥.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2014(02)
[8]2000-2009年中國李斯特菌病文獻(xiàn)報告病例分析[J]. 馮延芳,冉陸,張立實(shí).  疾病監(jiān)測. 2011(08)
[9]產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌血流感染1例報道[J]. 戚麗敏,崔屹,劉根焰.  微生物與感染. 2009(04)

碩士論文
[1]不同來源單核細(xì)胞增生性李斯特菌分離株的分子亞分型研究[D]. 王國梁.揚(yáng)州大學(xué) 2013



本文編號：3521150