為了探究玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）對(duì)離體B淋巴細(xì)胞活化、增殖及分化的影響,試驗(yàn)以BALB/c小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞為材料,分設(shè)細(xì)胞空白對(duì)照組（Control）、脂多糖對(duì)照組（LPS 5?g/m L）、不同濃度ZEA染毒組（LPS+10、20或30?mol/L ZEA）,CCK-8法檢測(cè)24 h時(shí)細(xì)胞相對(duì)活性,流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)6 h、72 h時(shí)淋巴細(xì)胞活化標(biāo)識(shí)分子CD69、CD71的表達(dá)量,以及72 h時(shí)漿細(xì)胞表面標(biāo)識(shí)分子CD138的表達(dá)量,CFSE法檢測(cè)B淋巴細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果顯示,ZEA在終濃度10、20、30?mol/L下均可顯著或極顯著地降低LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞相對(duì)活性,并導(dǎo)致細(xì)胞表面標(biāo)識(shí)分子CD69、CD71、CD138的表達(dá)量下降（P<0.05或P<0.01）。此外,ZEA還可抑制B細(xì)胞的增殖,且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論認(rèn)為,玉米赤霉烯酮可直接通過抑制小鼠B淋巴細(xì)胞的活化、增殖、分化,影響體液免疫的進(jìn)程,從而對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制作用。 

【文章來源】：中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(12)北大核心CSCD

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淋巴細(xì)胞純度鑒定Figure1TheidentificationofBlymphocytespurity00050100102103104105106（×104）APC-AFSC-A

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第50卷圖1B淋巴細(xì)胞純度鑒定Figure1TheidentificationofBlymphocytespurity圖2ZEA對(duì)LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞活性的影響Figure2TheeffectsofZEAonrelativesurvivalinLPS-mediatedBcellLPS組與空白對(duì)照組相比，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01。染毒組與LPS組相比，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。下同。LPSgroupwascomparedwiththecontrolgroup，#indicatesP＜0.05，##indicatesP＜0.01.ThetreatmentgroupswascomparedwiththeLPSgroup，*indicatesP＜0.05，**indicatesP＜0.01.Thesameasbelow.72h后，取樣離心，冷PBS清洗2次后將細(xì)胞懸液濃縮至100L，分別加入CD19-APC、CD69-FITC、CD71-PE、CD138-BV421單克隆抗體各1g，4℃下避光孵育30min，用冷PBS離心洗滌2次，重懸于300L的PBS中，立即上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。1.7CFSE標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞增殖將1.3項(xiàng)的淋巴細(xì)胞懸液用冷的PBS洗2次，用PBS配置成107/mL的單細(xì)胞懸液，加入CFSE染色工作液（終濃度為5mol/L）至細(xì)胞中，37℃避光水浴15min后加入9mLPBS洗滌1次，再加入10mLRPMI1640完全培養(yǎng)基洗滌1次，用培養(yǎng)基重懸后，于37℃，CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，用冷的PBS洗滌2次，重懸于300L的PBS中，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果2.1B淋巴細(xì)胞純度鑒定將免疫磁珠分選后的B淋巴細(xì)胞用CD19-APC標(biāo)記后，流式進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖1所示，細(xì)胞純度可達(dá)到95％以上，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。2.2ZEA對(duì)小鼠B淋巴細(xì)胞活性的影響小鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)24h后，加入CCK-8檢測(cè)液，每孔10L，于37℃、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h后用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果如圖2，可見加

第12期劉雙雙等：玉米赤霉烯酮對(duì)小鼠B淋巴細(xì)胞體外活化增殖及分化的影響圖3ZEA對(duì)LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞CD69表達(dá)的影響Figure3TheeffectsofZEAonexpressionofCD69inLPS-mediatedBcellA：ZEA對(duì)LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞CD69表達(dá)的影響；B：不同處理組CD19＋CD69＋占CD19＋總細(xì)胞比例。A：TheeffectofZEAontheexpressionofCD69inLPS-mediatedBcells；B：TheproportionofCD19＋CD69＋ofaccountedfortotalCD19＋cellsindifferenttreatmentgroups.圖4ZEA對(duì)LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞表達(dá)CD71的影響Figure4TheeffectsofZEAonexpressionofCD71inLPS-mediatedBcellA：ZEA對(duì)LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞CD71表達(dá)的影響；B：不同處理組CD19＋CD71＋占CD19＋總細(xì)胞比例。A：TheeffectofZEAontheexpressionofCD71inLPS-mediatedBcells；B：TheproportionofCD19＋CD71＋ofaccountedfortotalCD19＋cellsindifferenttreatmentgroups.CD71表達(dá)量極顯著升高（P＜0.01）。ZEA各染毒組與LPS組相比，B細(xì)胞CD71表達(dá)量均顯著或極顯著下降（P＜0.05或P＜0.01），且呈劑量依賴效應(yīng)。2.5ZEA對(duì)小鼠B淋巴細(xì)胞CD138表達(dá)的影響小鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)72h后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)漿細(xì)胞表面標(biāo)識(shí)分子CD138的表達(dá)。結(jié)果如圖5，與空白對(duì)照組相比，B細(xì)胞在LPS刺激72h后CD138表達(dá)量極顯著升高（P＜0.01）。ZEA各染毒組與LPS組相比，B細(xì)胞CD138表達(dá)量均極顯著下降（P＜0.01），且呈劑量依賴效應(yīng)。2.6ZEA對(duì)小鼠B淋巴細(xì)胞體外增殖影響將標(biāo)記過CFSE的B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)72h后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)B淋巴細(xì)胞的增殖。結(jié)果如圖6，在LPS刺激72h后，與空白對(duì)照組相比，原代B淋巴細(xì)胞的比例極顯著下降（P＜0.01）。加入ZEA后，各染毒組與LPS組相比原代B淋巴細(xì)胞的比例均顯著或極顯著升高（P＜0.05

【參考文獻(xiàn)】：
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