牛巴氏桿菌病又稱牛出血性敗血癥,簡稱牛出敗,（Haemorrhagic septicaemia of cattle,HSC）,是由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,Pm）引起的普遍流行于牛和水牛的高致病性、高死亡率傳染病,對養(yǎng)牛業(yè)構(gòu)成嚴(yán)重威脅。國內(nèi)引起牛出敗的病原菌主要為莢膜血清A群及B群的Pm菌株,而目前有關(guān)兩種血清型致病機(jī)制的區(qū)別尚不清楚。2016年末本實(shí)驗(yàn)室收到北京和山東兩個(gè)奶牛場送檢的各1頭病死成年牛組織,通過將病死牛組織感染小鼠,小鼠死亡后取組織染色鏡檢、接種血清TSA和麥康凱培養(yǎng)基,分離到2株疑似多殺性巴氏桿菌,命名為Pm1和Pm2。經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)特性及形態(tài)檢驗(yàn)、生化試驗(yàn)、16S rRNA基因測序、多殺性巴氏桿菌種特異性PCR、莢膜A、B血清群特異性PCR、脂多糖基因分型PCR、莢膜A群透明脂酸抑制試驗(yàn)鑒定其為莢膜血清A群、脂多糖3型多殺性巴氏桿菌。為探究A、B兩種血清群的差異,本課題利用RNA-seq技術(shù)對莢膜血清A群菌株P(guān)m1與B群菌株CVCC448轉(zhuǎn)錄組測序并進(jìn)行了系統(tǒng)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),兩株菌株的同源基因中有810個(gè)顯著差異基因,B群菌株相對于A群... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

涂片染色結(jié)果

2.3.4 16S rRNA 基因測序Pm1 和 Pm2 分離株的 4 個(gè) PCR 樣品均測出長約 1400nt 的序列。通過 NCBI 的Blast 搜索，這 4 條序列與 GenBank 中多殺性巴氏桿菌 16S rRNA 基因序列的同源性均為 99-100％，3 株 CVCC 參考株測序也得出同樣結(jié)果。同時(shí)將 Pm1 和 Pm2 的 16S rRNA 序列上傳至 NCBI 獲取其 GenBank 登錄號：Pm（MH150893）、Pm2（MH150894）。2.3.5 PCR 鑒定 Pm 種、莢膜分群和脂多糖基因型結(jié)果見圖 2-2。三組 PCR 中陰性對照都無擴(kuò)增。分離株 Pm1、Pm2 和 3 個(gè)參考株都擴(kuò)增出約 0.5 kb（460 bp）的 Pm 種特異性條帶；莢膜分群 PCR 中 CVCC1672群參考株與 A、B 群引物都不反應(yīng)，分離株 Pm1 和 Pm2 擴(kuò)增出約 1 kb（1044 bp）的莢膜 A 群條帶，CVCC448 和 1668（B 群）擴(kuò)增出約 0.8kb（760 bp）的莢膜 B 群條帶。脂多糖基因型鑒定 PCR 顯示參考株 CVCC1672（A 群）不產(chǎn)生任何條帶，分離株 Pm1 和 Pm2 擴(kuò)增出約 0.5kb（474 bp）的脂多糖 3 型條帶，CVCC448（B 群）和1668（B 群）擴(kuò)增出約 0.8kb（810 bp）的脂多糖 2 型條帶。

顯；CVCC448（B 群）則未被抑制，與預(yù)期相符。該試驗(yàn)重復(fù)過 4 次，C2 次弱陽性，2 次陰性，新分離菌和陰性對照 4 次結(jié)果相同。本試驗(yàn)用，即有文獻(xiàn)介紹的金黃色葡萄球菌和我們實(shí)驗(yàn)室常用于給某些細(xì)菌提皮葡萄球菌。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)表皮葡萄球菌抑制透明脂酸的作用更明顯些。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]犢牛支原體肺炎繼發(fā)牛A型多殺性巴氏桿菌感染的診治[J]. 賴金倫,寇明明,劉玉輝,朱習(xí)芳,劉婧,姜鵬,陳穎鈺,胡長敏,郭愛珍.  中國畜牧獸醫(yī). 2015(11)
[2]7株牛源A型巴氏桿菌的分離鑒定及耐藥性分析[J]. 王梓,孔令聰,賈博巖,劉樹明,馬紅霞.  中國獸藥雜志. 2015(07)
[3]牛出血性敗血癥的流行特點(diǎn)及防治[J]. 董永華.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2014(08)
[4]6株牛源A型多殺性巴氏桿菌的分離與鑒定[J]. 楊寶鳳,李能章,鄒靈秀,黃園媛,吳建云,王自力,魏學(xué)良,彭遠(yuǎn)義.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(06)
[5]轉(zhuǎn)錄組學(xué)在藥用植物研究中的應(yīng)用[J]. 吳瓊,孫超,陳士林,羅紅梅,李瀅,孫永珍,牛云云.  世界科學(xué)技術(shù)(中醫(yī)藥現(xiàn)代化). 2010(03)
[6]牛莢膜血清A型巴氏桿菌病的分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 馬文戈,姜志剛,于力.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(05)
[7]牛源莢膜血清A型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定[J]. 馬文戈,于力.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(10)
[8]重組產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌毒素PMT的N-端和C-端蛋白的生物學(xué)活性及免疫原性[J]. 湯細(xì)彪,吳斌,趙戰(zhàn)勤,鄧永,何華,何啟蓋,陳煥春.  微生物學(xué)報(bào). 2008(02)
[9]豬源產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌HN-13株外膜蛋白H的基因克隆與特征（英文）[J]. 李良軍,黎璐,李健,張四化,吳斌,陳煥春,周銳.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2007(02)
[10]鴿源多殺性巴氏桿菌血清學(xué)鑒定[J]. 毛跟年,許牡丹,楊秀芳.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 1999(03)

博士論文
[1]變性蛋白復(fù)性裝置研制及包涵體蛋白變性和復(fù)性技術(shù)研究[D]. 馮延葉.華東理工大學(xué) 2013

碩士論文
[1]大腸桿菌O157:H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制劑蛋白的抗原表位驗(yàn)證[D]. 林敏玲.廣西大學(xué) 2016
[2]豬多殺性巴氏桿菌PlpB與Fur基因融合表達(dá)及免疫效果評價(jià)[D]. 蔣惠婷.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2014
[3]鴨多殺性巴氏桿菌OmpH單克隆抗體的制備及阻斷ELISA檢測方法的建立[D]. 盧艷.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2012
[4]致犢牛肺炎多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及部分生物學(xué)特性研究[D]. 馬曉菁.石河子大學(xué) 2010
[5]豬源多殺性巴氏桿菌體內(nèi)表達(dá)基因的篩選及間接ELISA方法的建立[D]. 黃先奇.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[6]嗜酸氧化亞鐵硫桿菌硫氧還蛋白系統(tǒng)的表達(dá)純化及定點(diǎn)突變[D]. 王億平.中南大學(xué) 2009



本文編號：3517264