空腸彎曲菌（Campylobacterjejuni,C.jejuni）為革蘭氏陰性菌,是近十幾年來受到國內(nèi)外學(xué)者廣泛重視的一種重要的人獸共患病原菌。其中,鞭毛及其介導(dǎo)的運動性被認為是該菌重要的毒力因素。目前,空腸彎曲菌鞭毛結(jié)構(gòu)已被廣泛研究,但對其基因合成及調(diào)控機制知之甚少。其中,FlhF是影響空腸彎曲菌鞭毛合成以及運動力的關(guān)鍵蛋白,其失活導(dǎo)致鞭毛及運動力完全缺失,具體影響機制并未闡明。考慮FlhF對鞭毛合成的重要性,推測FlhF對鞭毛合成除了間接調(diào)控作用,還可能作為一個轉(zhuǎn)錄因子,直接調(diào)控鞭毛基因表達,但FlhF轉(zhuǎn)錄功能及機制也未見報道。本研究成功構(gòu)建flhF缺失株和回復(fù)株,以及B、N、G結(jié)構(gòu)域回復(fù)株,通過運動力實驗及透射電鏡觀察進一步分析FlhF蛋白結(jié)構(gòu)域?qū)Ρ廾铣傻挠绊?利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)探究了 FlhF在鞭毛合成通路中影響效應(yīng);利用EMSA、ChIP-qPCR及LacZ報告質(zhì)粒檢測實驗等技術(shù)篩選并驗證FlhF轉(zhuǎn)錄調(diào)控靶標,進一步解析FlhF在空腸彎曲菌鞭毛合成中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控通路。一、空腸彎曲菌FlhF蛋白結(jié)構(gòu)域?qū)Ρ廾铣傻挠绊懛治鯢lhF蛋白具有B、N、G 3個結(jié)構(gòu)域。為探究FlhF... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１空腸彎曲菌８１－１７６＿／７／？尸突變株＆＿／７／�。�；Ｂ／Ｎ／Ｇ?ｄｏｍａｉｎ回復(fù)株的鑒定??

?揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文???３．２?Ｂ／Ｎ／Ｇ單結(jié)構(gòu)域回復(fù)對鞭毛合成及運動力表型的影響??通過運動力實驗以及透射電子顯微鏡觀察，本研究初步分析了?Ｂ／Ｎ／Ｇ單結(jié)構(gòu)域?qū)漳c??彎曲菌鞭毛及運動力表型的影響。我們首先將野生株８１－１７６?（ＷＴ）與Ｂ／Ｎ／Ｇ單結(jié)構(gòu)域回??復(fù)株穿刺接種至ＭＨ半固體平板上來比較其運動力差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野生株８１－１７６從接種??處向四周擴散進而形成圓環(huán)狀，而與其運動力相比，Ｂ、Ｎ及Ｇ單結(jié)構(gòu)域回復(fù)株均呈現(xiàn)無??運動力表型（圖１－２）。通過透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)野生株８１－１７６鞭毛表型正常（圖??１－３Ａ），其中細菌鞭毛表型正常占９１％，包括極鞭毛（１３％）和兩極鞭毛（７８％）（表１－５）；??極少部分無鞭毛表型可能是因為在操作過程中細菌鞭毛脫落。與之相比，Ｂ、Ｎ及Ｇ單結(jié)??構(gòu)域回復(fù)株均無法觀察到鞭毛（圖１－３Ｂ－Ｄ）。考慮ＦｌｈＦ缺失導(dǎo)致鞭毛及運動力完全消失，??綜合結(jié)果，我們推測Ｂ、Ｎ及Ｇ單結(jié)構(gòu)域回復(fù)無法回復(fù)鞭毛及運動力表型。??圖１－２空腸彎曲菌菌株運動力比較??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｍｏｔｉｌｉｔｙ?ｂｅｔ＾?ｅｅｎ?Ｃ．?ｊｅｊｕｎｉ?ｓｔｒａｉｎｓ??１８??

?第一章空腸彎曲菌ＦｌｈＦ對鞭毛合成的影響分析???８１，１７６?Ｂ?ｄｏｍｉｉｓ?ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ?ｓｔｒａｉｓ??／??，Ａ?ｌｊ￡Ｐ?Ｂ??Ｎ?ｄｏｍａｉｎ?ｃｏｑ＾ｌｅｎｉｅｏｔｅｄ?ｓｔｒａｉｎ?’?Ｇ?ｄｏｍａｉｎ?ｃｏｍｐｌｅｍｅＢｌｅｄ?ｓｔｒｔｉａ??＼?＾??ｔ??４＊＇??２?ｐｍ?、Ｃ?Ｌｈｉｔ?ｆ?Ｄ??圖１－３透射電子顯微鏡觀察空腸彎曲菌鞭毛??Ｆｉｇ?１－３?Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓ?ｏｆ?Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ?ｆｌａｇｅｌｌａ??表１－５空腸彎曲菌鞭毛表型情況??Ｔａｂｌｅ?１－５?Ｔｈｅ?ｆｌａｇｅｌｌａ?ｐｈｅｎｏｔ＼ｐｅ?ｏｆ?Ｃ．?ｊｅｊｕｎｉ?ｓｔｒａｉｎｓ??＃?Ｆｌａｇｅｌｌｕｍ?ｎｕｍｂｅｒ??Ｓｔｒａｉｎ?日?Ｎｏｒｍａｌ?ｆｌａｇｅｌｌａ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ??菌株?￣￣－￣￣￣￣－—?正常鞭毛表型??８１－１７６?７８?１３?９?９１％??Ｂ／Ｎ／Ｇ?ｄｏｍａｉｎ?ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ??０?０?１００?０％??ｓｔｒａｉｎ??３Ｊ?ＢＮ／ＮＧ／ＢＧ雙結(jié)構(gòu)域回復(fù)株的構(gòu)建與鑒定??為構(gòu)建ＢＮ／ＮＧ／ＢＧ雙結(jié)構(gòu)域回復(fù)株，首先構(gòu)建ｐＵＯＡ１８－Ｐｍｅ漢－ＢＮ／ＮＧ／ＢＧｄｏｍａｉｎ重??組質(zhì)粒，在ＬＢ平板（含氯霉素）上進行篩選，選取單菌落并提取質(zhì)粒進行鑒定。如圖１－４??Ａ－Ｂ所示，回復(fù)載體ｐＵＯＡｌ?８－Ｐｗｅ／Ａ：－ＢＮ／ＮＧ／ＢＧ?ｄｏｍａｉｎ經(jīng)５謂／／１單酶切后，電泳出現(xiàn)８．８５??ｋｂ、９．２?ｋｂ以及８．８?ｋｂ大小的片段；經(jīng)５續(xù)／／１和＊Ｓａｃ?Ｉ雙酶切后

【參考文獻】：
期刊論文
[1]空腸彎曲菌FlhF單克隆抗體的制備與鑒定[J]. 任方哲,王楠,商宇偉,焦新安,黃金林.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2013(12)
[2]空腸彎曲菌鞭毛研究進展[J]. 任方哲,王楠,商宇偉,焦新安,黃金林.  中國人獸共患病學(xué)報. 2013(08)
[3]空腸彎曲桿菌感染的研究現(xiàn)狀[J]. 張佩鑫.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2012(09)

博士論文
[1]空腸彎曲菌FlhF調(diào)節(jié)鞭毛合成分子機制及其對細菌毒力的影響分析[D]. 任方哲.揚州大學(xué) 2019
[2]溶藻弧菌中σE和群體感應(yīng)系統(tǒng)介導(dǎo)的毒力調(diào)控機制[D]. 顧丹.華東理工大學(xué) 2016

碩士論文
[1]腸炎沙門菌轉(zhuǎn)錄因子SEN2967和SEN3610調(diào)控基因的篩選與鑒定[D]. 陳韻.揚州大學(xué) 2017



本文編號：3516946