發(fā)布時(shí)間：2021-11-23 19:36

　　濟(jì)寧青山羊是我國(guó)一個(gè)優(yōu)秀地方品種，具有性成熟早和繁殖率高的特點(diǎn)。從激素和受體表達(dá)水平等角度研究青山羊性發(fā)育過(guò)程，對(duì)于闡明濟(jì)寧青山羊性成熟早的機(jī)理和培育新的高繁殖力山羊品種或品系等具有重要意義。本研究以雌性濟(jì)寧青山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，應(yīng)用放射免疫、組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)、透射電鏡、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和WesternBlot等方法，從激素水平、細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平和分子水平等層面系統(tǒng)研究從出生到性成熟山羊血液中雌孕激素的波動(dòng)、雌孕激素受體在下丘腦-垂體-卵巢軸以及雌孕激素受體在生殖器官發(fā)育過(guò)程中的增齡性分布特點(diǎn)及變化規(guī)律。研究結(jié)果顯示，在雌性濟(jì)寧青山羊生后發(fā)育階段：①下丘腦與生殖有關(guān)的核團(tuán)均有ER和PR陽(yáng)性細(xì)胞分布，各核團(tuán)ERα、ERβ和PR陽(yáng)性細(xì)胞隨日齡增長(zhǎng)而數(shù)量增多，且同一日齡同一核團(tuán)內(nèi)ERβ陽(yáng)性著色明顯強(qiáng)于ERα（p<0.05）。PR免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元的分布和變化規(guī)律與ERβ基本一致。ERα、ERβ和PR陽(yáng)性細(xì)胞在下丘腦中分布的增齡性變化與濟(jì)寧青山羊性發(fā)育和性早熟的特點(diǎn)密切相關(guān)；②腺垂體嗜色細(xì)胞隨著年齡增長(zhǎng)而數(shù)量增多，體積增大；ERα主要分布于嗜色細(xì)胞的細(xì)胞核，ERβ和PR主要分布于... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
Abstract
前言
    1.1 下丘腦-垂體-卵巢軸
    1.2 雌、孕激素及其受體的結(jié)構(gòu)和功能
    1.3 性發(fā)育過(guò)程中外周血中雌、孕激素含量的變化
    1.4 雌、孕激素及其受體在下丘腦的研究
    1.5 雌、孕激素及其受體在腺垂體的研究
    1.6 雌、孕激素及其受體在卵巢的研究進(jìn)展
    1.7 雌、孕激素及其受體在子宮的研究
    1.8 雌、孕激素及其受體在輸卵管的研究
    1.9 濟(jì)寧青山羊
    1.10 目的意義
    1.11 技術(shù)路線
材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 取材方法
        2.1.3 試驗(yàn)地點(diǎn)
        2.1.4 主要儀器設(shè)備及產(chǎn)地
        2.1.5 主要試驗(yàn)試劑及來(lái)源
        2.1.6 主要生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和生物學(xué)軟件
    2.2 血清激素水平的測(cè)定
    2.3 細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)
        2.3.1 切片標(biāo)本制備
        2.3.2 HE 染色
        2.3.3 PAS( Periodic acid - Schiff )染色
        2.3.4 甲苯胺藍(lán)( Toluidine blue )染色
        2.3.5 瑞氏（Wright's staim）染色
        2.3.6 免疫組織化學(xué) SABC 染色及圖像分析
    2.4 透射電鏡觀察
    2.5 實(shí)時(shí)定量 RT-PCR
        2.5.1 總 RNA 的提取及質(zhì)量鑒定
        2.5.2 引物設(shè)計(jì)及優(yōu)化
        2.5.3 模板 DNA 的合成與 qRT-PCR
        2.5.4 qRT-PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及熒光定量數(shù)據(jù)分析
    2.6 免疫印跡與分析
        2.6.1 蛋白樣品制備與蛋白含量檢測(cè)
        2.6.2 SDS-PAGE 電泳
        2.6.3 轉(zhuǎn)膜與免疫反應(yīng)
        2.6.4 凝膠圖象分析
    2.7 數(shù)據(jù)處理
結(jié)果
    3.1 濟(jì)寧青山羊后發(fā)育階段下丘腦中 ERα、ERβ和 PR 陽(yáng)性細(xì)胞的增齡性變化
        3.1.1 血清中激素含量的測(cè)定結(jié)果
        3.1.2 下丘腦核團(tuán) HE 染色結(jié)果
        3.1.3 濟(jì)寧青山羊下丘腦各核團(tuán) ERα和 ERβ免疫陽(yáng)性細(xì)胞的發(fā)育性變化
        3.1.4 濟(jì)寧青山羊下丘腦各核團(tuán) PR 免疫陽(yáng)性細(xì)胞的發(fā)育性變化
    3.2 濟(jì)寧青山羊生后發(fā)育階段腺垂體細(xì)胞的增齡性變化以及雌、孕激素受體的分布與表達(dá)特點(diǎn)
        3.2.1 雌性濟(jì)寧青山羊生后腺垂體的發(fā)育性變化
        3.2.2 雌性濟(jì)寧青山羊腺垂體 ERα、ERβ和 PR 免疫陽(yáng)性細(xì)胞的發(fā)育性變化
        3.2.3 青山羊腺垂體 Western blotting 結(jié)果及分析
    3.3 濟(jì)寧青山羊生后卵巢發(fā)育特性與雌、孕激素受體的分布其 mRNA 的表達(dá)
        3.3.1 不同日齡卵巢的組織學(xué)觀察
        3.3.2 總 RNA 及 qRT-PCR 產(chǎn)物的鑒定
        3.3.3 qRT-PCR 產(chǎn)物熔解曲線分析
        3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及其目的基因的擴(kuò)增效率
        3.3.5 卵巢內(nèi) ERα和 ERβ免疫陽(yáng)性產(chǎn)物及其 mRNA 表達(dá)的發(fā)育性變化
        3.3.6 卵巢內(nèi) PR 免疫陽(yáng)性產(chǎn)物及其 mRNA 表達(dá)的發(fā)育性變化
    3.4 濟(jì)寧青山羊生后發(fā)育階段子宮內(nèi) ERα、ERβ和 PR 的分布及其 mRNA 的表達(dá)
        3.4.1 ERα免疫陽(yáng)性細(xì)胞在生后發(fā)育時(shí)期子宮內(nèi)的分布及 mRNA 表達(dá)
        3.4.2 ERβ免疫陽(yáng)性細(xì)胞在生后發(fā)育時(shí)期子宮內(nèi)的分布及 mRNA 表達(dá)
        3.4.3 PR 免疫陽(yáng)性細(xì)胞在生后發(fā)育時(shí)期子宮內(nèi)的分布及 mRNA 表達(dá)
    3.5 濟(jì)寧青山羊生后發(fā)育階段輸卵管壺腹部與傘部粘膜上皮的試驗(yàn)觀察
        3.5.1 不同月齡輸卵管粘膜上皮細(xì)胞的組織化學(xué)染色結(jié)果
        3.5.2 輸卵管粘膜上皮“腔排”現(xiàn)象電鏡觀察結(jié)果
        3.5.3 輸卵管粘膜上皮細(xì)胞免疫組化染色結(jié)果
討論
    4.1 濟(jì)寧青山羊后發(fā)育階段血清中 E2 和 P 的分泌變化與下丘腦中 ERα、ERβ和 PR陽(yáng)性細(xì)胞的分布特點(diǎn)
    4.2 雌性濟(jì)寧青山羊生后發(fā)育階段腺垂體細(xì)胞的增齡性變化以及與雌、孕激素受體的關(guān)系
    4.3 濟(jì)寧青山羊生后卵巢發(fā)育特性以及與雌、孕激素受體的關(guān)系研究
        4.3.1 濟(jì)寧青山羊卵巢的生后發(fā)育特點(diǎn)
        4.3.2 雌孕激素受體在青山羊生后發(fā)育卵巢中的分布
        4.3.3 雌、孕激素受體及其 mRNA 的表達(dá)水平與青山羊生后卵巢發(fā)育的關(guān)系
    4.4 濟(jì)寧青山羊子宮內(nèi) ERα、ERβ和 PR 的分布及其 mRNA 表達(dá)的增齡性變化
        4.4.1 生后發(fā)育時(shí)期 ERα、ERβ免疫陽(yáng)性細(xì)胞在子宮中的分布特點(diǎn)及其 mRNA 表達(dá)
        4.4.2 生后發(fā)育時(shí)期 PR 免疫陽(yáng)性細(xì)胞在子宮中的分布特點(diǎn)及其 mRNA 表達(dá)
        4.4.3 ERα、ERβ和 PR 在子宮發(fā)育過(guò)程中的作用
    4.5 濟(jì)寧青山羊生后輸卵管壺腹部與傘部粘膜上皮的發(fā)育性變化
        4.5.1 濟(jì)寧青山羊輸卵管壺腹部與傘部上皮的生后發(fā)育特點(diǎn)
        4.5.2 生殖激素受體在生后發(fā)育階段輸卵管壺腹部與傘部上皮中的表達(dá)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]濟(jì)寧青山羊生后發(fā)育階段GnRH與GnRHR陽(yáng)性細(xì)胞在下丘腦分布規(guī)律的研究[J]. 劉宵,王樹迎,尹玉濤,張德敏,黃麗波,侯衍猛.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(08)
[2]魯西南地區(qū)青山羊種質(zhì)資源調(diào)查與分析[J]. 許騰.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2011(01)
[3]雌激素受體在老年和青年獼猴下丘腦中表達(dá)的比較[J]. 陳正禮,羅啟慧,曾文,程安春.  獸類學(xué)報(bào). 2010(02)
[4]神經(jīng)肽Y-Y1受體基因（NPY-Y1R）多態(tài)性及其與山羊繁殖性能關(guān)系[J]. 儲(chǔ)明星,馮濤,趙有璋,張英杰,方麗,狄冉.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2009(06)
[5]湖羊高繁殖力候選基因ESR的研究[J]. 董文艷,陳阿琴,王爭(zhēng)光,俞頌東.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2009(06)
[6]雌激素受體α在雌性大鼠腦中的表達(dá)[J]. 吳建云,田茂春,王鮮忠,范光麗,張家驊.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(11)
[7]山羊雌激素受體（ESR）基因部分外顯子多態(tài)性分析[J]. 馮濤,趙有璋,狄冉,儲(chǔ)明星,張英杰,方麗.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2009(02)
[8]濟(jì)寧青山羊品種資源調(diào)查[J]. 蔡泉.  中國(guó)草食動(dòng)物. 2008(06)
[9]妊娠期牦牛輸卵管的組織結(jié)構(gòu)觀察[J]. 譚娟,余四九,崔燕.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2008(07)
[10]IFN-γR和ER在大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸中的共表達(dá)[J]. 何書海,趙慧英,樂(lè)濤,曾偉偉,李燕麗,周旭,張發(fā).  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(11)

碩士論文
[1]青山羊生后發(fā)育過(guò)程中GTH分泌與輸卵管中GTH受體表達(dá)規(guī)律的研究[D]. 李泰云.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]雌激素受體亞型在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜及小白鼠模型中的表達(dá)及意義[D]. 張翼海.中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 2009
[3]萊蕪黑山羊松果體與下丘腦的組織學(xué)與免疫組織化學(xué)的研究[D]. 王凌燕.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3514519