發(fā)布時間：2021-11-23 14:27

　　豬病已成為當(dāng)前制約養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的關(guān)鍵因素之一,其中豬藍耳病和圓環(huán)病毒病為危害世界養(yǎng)豬生產(chǎn)的兩大重要的疫病。PRRSV和PCV2都是能導(dǎo)致豬繁殖障礙的主要病原,此外,造成豬的免疫抑制,引起其他病原微生物的繼發(fā)或并發(fā)感染,給世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。豬的遺傳學(xué)組成能夠影響宿主對病毒的易感。研究表明,不同的豬種間對PRRSV和PCV2相關(guān)疾病的易感性存在差異是由于宿主遺傳差異導(dǎo)致的。本研究首先對與PRRSV抗性相關(guān)的兩個候選基因USP18和Mx1進行了啟動子區(qū)功能分析,然后在實驗條件下,研究遺傳背景不同的萊蕪豬和大長雜交商品豬對PCV2易感是否存在差異以及探討抗性或易感差異的分子機制,尋找與豬抗PPRSV和PCV2有關(guān)的分子標記。主要的研究結(jié)果如下:1.本研究對比了中國地方豬種大蒲蓮豬和杜-大-長雜交商品豬USP18基因啟動子區(qū)活性,以及篩選了單核苷酸多態(tài)性對USP18轉(zhuǎn)錄的影響。我們發(fā)現(xiàn)大蒲蓮豬的啟動子活性明顯高于杜-大-長雜交商品豬（P<0.05）;啟動子刪除試驗中,當(dāng)啟動子從-1790刪除到-1314時,其轉(zhuǎn)錄活性下降約60%（P<0.05）;同時MARC-145... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 豬藍耳病的相關(guān)研究進展
        1.1.1 豬對PRRSV感染存在抗性差異
        1.1.2 USP18基因的研究現(xiàn)狀
        1.1.3 Mx1基因的研究現(xiàn)狀
    1.2 豬圓環(huán)病毒的研究進展
        1.2.1 豬圓環(huán)病毒基因組和分類
        1.2.2 豬圓環(huán)病毒的起源和演化
        1.2.3 豬圓環(huán)病毒的流行現(xiàn)狀
        1.2.4 臨床疾病
        1.2.5 PCV2發(fā)病機制
        1.2.6 在PCV2發(fā)病機制中細胞因子的作用
    1.3 RNA-seq技術(shù)
    1.4 SERPINA1基因的研究現(xiàn)狀
    1.5 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗動物及攻毒
        2.1.2 樣品采集
        2.1.3 毒株
        2.1.4 菌株及載體
        2.1.5 主要實驗儀器和設(shè)備
        2.1.6 主要試劑和試劑盒及來源
        2.1.7 常用試劑的配制
        2.1.8 主要數(shù)據(jù)庫和生物學(xué)軟件
    2.2 實驗方法
        2.2.1 豬基因組DNA的提取
        2.2.2 總RNA的提取及檢測
        2.2.3 質(zhì)粒DNA的提�。═iangen試劑盒）
        2.2.4 凝膠回收PCR產(chǎn)物
        2.2.5 USP18和Mx1基因 5'調(diào)控區(qū)分析
        2.2.6 豬對PCV2感染的生物學(xué)反應(yīng)
        2.2.7 RNA-seq分析肺組織差異表達基因
        2.2.8 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 USP18基因 5'調(diào)控區(qū)多態(tài)性分析
        3.1.1 大蒲蓮豬和大長雜交商品豬啟動子活性比較
        3.1.2 USP18基因啟動子刪除載體雙熒光素酶活性分析
        3.1.3 USP18基因啟動子區(qū)突變對PRRSV感染的影響
        3.1.4 不同品種中G–1533A位點的多態(tài)性分析
    3.2 Mx1基因 5'調(diào)控區(qū)多態(tài)分析
        3.2.1 Mx1基因 5'調(diào)控區(qū)擴增及載體構(gòu)建
        3.2.2 Mx1基因啟動子區(qū)刪除載體熒光素酶活性比較
        3.2.3 PRRSV感染對Mx1基因不同載體啟動子活性影響
        3.2.4 不同豬種中?547位點多態(tài)性的群體檢測
    3.3 不同品種豬對PCV2感染的生物學(xué)反應(yīng)
        3.3.1 萊蕪豬和大長雜交商品豬對感染PCV2后的臨床癥狀比較
        3.3.2 萊蕪豬和大長雜交商品豬體溫體重變化
        3.3.3 剖檢病變
        3.3.4 PCV2感染 35d時萊蕪豬和大長雜交商品豬肺臟和脾臟的病理變化
        3.3.5 PCV2感染對免疫球蛋白IgG的影響
        3.3.6 PCR測定萊蕪豬和大長雜交商品豬血清中PCV2病毒的含量
        3.3.7 萊蕪豬和大長雜交商品豬感染PCV2后血清中病毒拷貝數(shù)變化
        3.3.8 PCV2感染不同時期豬細胞因子蛋白水平表達的變化
    3.4 萊蕪豬和大長雜交商品豬肺組織差異表達基因的篩選
        3.4.1 總RNA質(zhì)量檢測
        3.4.2 表達譜測序及生物信息學(xué)分析
        3.4.3 差異表達基因的篩選
        3.4.4 差異表達基因的GO功能注釋結(jié)果
        3.4.5 差異基因KEGG分析
        3.4.6 差異表達基因的定量PCR檢測
4 討論
    4.1 與PRRSV抗性相關(guān)的兩個基因啟動子區(qū)多態(tài)性分析
        4.1.1 USP18基因啟動子區(qū)多態(tài)性分析
        4.1.2 Mx1基因啟動子區(qū)多態(tài)性分析
    4.2 萊蕪豬和大長雜交商品豬對PCV2感染的臨床癥狀
    4.3 PCV2感染后血清中細胞因子蛋白水平的動態(tài)變化
    4.4 差異表達基因的篩選與鑒定
5 結(jié)論
參考 文獻
致謝
附錄
博士期間發(fā)表論文和專利情況


【參考文獻】：
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本文編號：3514071