超低溫冷凍技術(shù)可以長久保存動物精子，但是凍融的過程中會嚴(yán)重影響精子的生理功能和形態(tài)特征。凍融過程中精子會受到氧自由基的攻擊，這將直接改變膜的理化性質(zhì)，對線粒體活性造成損傷從而影響其活力，同時會造成蛋白質(zhì)表達(dá)量和功能的改變，最終導(dǎo)致不能成功受精。而褪黑素可以去除氧自由基，起到抗氧化保護(hù)作用，從而減少對精子帶來的氧化性損傷。本論文以綿羊同一批次添加1mM褪黑素的實驗組與不添加褪黑素的空白對照組的兩組凍融后精子作為實驗材料，利用2-DE構(gòu)建了冷凍前添加褪黑素對綿羊精子凍融后兩組蛋白質(zhì)的差異蛋白圖譜。最后用PDQuest8.0分析軟件對凝膠圖譜蛋白質(zhì)點進(jìn)行分析，并檢測差異蛋白。結(jié)果顯示：（1）精子冷凍保護(hù)液中褪黑素添加濃度為1mM時比不添加褪黑素的解凍后精子活率高，用17cm（pH3～10）膠條對綿羊精子蛋白進(jìn)行試驗，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色后最適上樣量為0.45mg。（2）在兩組凝膠上共檢測到12個差異蛋白質(zhì)斑點，在添加褪黑素的實驗組凝膠上表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)斑點有5個，表達(dá)下調(diào)的有7個。差異蛋白質(zhì)斑點經(jīng)鑒定，在國際生物信息學(xué)中心數(shù)據(jù)庫搜索到相對應(yīng)的5種蛋白質(zhì)。它們分別芳基硫酸酯酶A、α-烯醇酶3、21... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

標(biāo)準(zhǔn)曲線

SDS-PAGE電泳結(jié)果

Fig. 3 The 2-D map for 0.45mg loading quantity羊精子上樣量進(jìn)行探索，所以本實驗直接采用質(zhì)斑點總數(shù)為 372～396 個，數(shù)量比較多且背景量為 0.45mg。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水牛冷凍精液稀釋液中添加SOD、GSH對精子品質(zhì)的影響[J]. 易康樂,謝英,黃衛(wèi)紅,許典新,蔣如明.  廣西畜牧獸醫(yī). 2005(05)
[2]生育和不育男性精液SOD活性的研究[J]. 陳國千,陸永綏.  中華泌尿外科雜志. 1994(04)
[3]氧自由基與精子功能[J]. 段東升.  男性學(xué)雜志. 1990(02)



本文編號：3512455