超低溫冷凍技術(shù)可以長久保存動(dòng)物精子，但是凍融的過程中會(huì)嚴(yán)重影響精子的生理功能和形態(tài)特征。凍融過程中精子會(huì)受到氧自由基的攻擊，這將直接改變膜的理化性質(zhì)，對(duì)線粒體活性造成損傷從而影響其活力，同時(shí)會(huì)造成蛋白質(zhì)表達(dá)量和功能的改變，最終導(dǎo)致不能成功受精。而褪黑素可以去除氧自由基，起到抗氧化保護(hù)作用，從而減少對(duì)精子帶來的氧化性損傷。本論文以綿羊同一批次添加1mM褪黑素的實(shí)驗(yàn)組與不添加褪黑素的空白對(duì)照組的兩組凍融后精子作為實(shí)驗(yàn)材料，利用2-DE構(gòu)建了冷凍前添加褪黑素對(duì)綿羊精子凍融后兩組蛋白質(zhì)的差異蛋白圖譜。最后用PDQuest8.0分析軟件對(duì)凝膠圖譜蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行分析，并檢測差異蛋白。結(jié)果顯示：（1）精子冷凍保護(hù)液中褪黑素添加濃度為1mM時(shí)比不添加褪黑素的解凍后精子活率高，用17cm（pH3～10）膠條對(duì)綿羊精子蛋白進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色后最適上樣量為0.45mg。（2）在兩組凝膠上共檢測到12個(gè)差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，在添加褪黑素的實(shí)驗(yàn)組凝膠上表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)有5個(gè)，表達(dá)下調(diào)的有7個(gè)。差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)經(jīng)鑒定，在國際生物信息學(xué)中心數(shù)據(jù)庫搜索到相對(duì)應(yīng)的5種蛋白質(zhì)。它們分別芳基硫酸酯酶A、α-烯醇酶3、21... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

標(biāo)準(zhǔn)曲線

SDS-PAGE電泳結(jié)果

Fig. 3 The 2-D map for 0.45mg loading quantity羊精子上樣量進(jìn)行探索，所以本實(shí)驗(yàn)直接采用質(zhì)斑點(diǎn)總數(shù)為 372～396 個(gè)，數(shù)量比較多且背景量為 0.45mg。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水牛冷凍精液稀釋液中添加SOD、GSH對(duì)精子品質(zhì)的影響[J]. 易康樂,謝英,黃衛(wèi)紅,許典新,蔣如明.  廣西畜牧獸醫(yī). 2005(05)
[2]生育和不育男性精液SOD活性的研究[J]. 陳國千,陸永綏.  中華泌尿外科雜志. 1994(04)
[3]氧自由基與精子功能[J]. 段東升.  男性學(xué)雜志. 1990(02)



本文編號(hào)：3512455