本研究通過(guò)培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞,并以該細(xì)胞為研究對(duì)象,研究中藥復(fù)方透皮貼劑和中藥復(fù)方灌注液對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖、總蛋白含量以及β-酪蛋白含量的影響。從奶牛乳房無(wú)菌采取乳腺組織,通過(guò)體外原代培養(yǎng)、分離純化以及傳代等方法建立穩(wěn)定的奶牛乳腺上皮細(xì)胞系。倒置顯微鏡下對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行觀察,做形態(tài)學(xué)鑒定；繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；通過(guò)SDS-PAGE電泳鑒定奶牛乳腺上皮細(xì)胞所分泌的p-酪蛋白。制備中藥復(fù)方透皮貼劑及其主要成分的單味中藥提取物和中藥復(fù)方灌注液及其主要成分的單味中藥提取物,添加到奶牛乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中,研究其對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖、總蛋白以及p-酪蛋白含量的影響。試驗(yàn)結(jié)果如下：本試驗(yàn)中,通過(guò)組織塊培養(yǎng)法可獲得奶牛乳腺細(xì)胞,通過(guò)胰蛋白酶多次消化的方法可基本去除奶牛乳腺細(xì)胞中的成纖維細(xì)胞,獲得較為純化的奶牛乳腺上皮細(xì)胞；經(jīng)過(guò)傳代以后,奶牛乳腺上皮細(xì)胞的形態(tài)以及生理功能不發(fā)生改變,從而建立了穩(wěn)定的奶牛乳腺上皮細(xì)胞系。采用不同濃度的中藥復(fù)方灌注液及其單味中藥的提取液處理奶牛乳腺上皮細(xì)胞1d后,在濃度為10 mg·mL-1時(shí)OD值最大,但促進(jìn)細(xì)胞增殖的效果不顯著（P>0.05）。采用10... 

【文章來(lái)源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１奶牛乳腺上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察??

圖２－１奶牛乳腺上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察??Ｆｉｇ．２－１?ｄａｉｒｙ?ｃｏｗ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ??Ａ－Ｄ．培養(yǎng)口ｄ的原代細(xì)胞ＯＯＯＯ：?Ｅ－任原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)膜蛋白酶純化后，上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞分界（ｌＯＯｘ）?Ｈ．第３代，鋪路??石狀乳腺上皮細(xì)胞（２０００；?Ｉ．第３代，鋪路石狀乳腺上皮細(xì)施（ｌＯＯｘ）；?Ｊ－Ｋ．第３代，分泌乳滴的乳腺上皮細(xì)胞ＵＯＯｘ）；??Ａ－Ｂ．?Ｐｒｉｍａｒｙ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉ化ｅｌｉａ］?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｃｕｌｔｕｃｄ?ｆｏｒ?１２?ｄａｙｓ（?１００?巳－Ｇ．?Ｔｈｅ?ｃｌｅａｒ?ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｅｐｉ化ｄｉａｌ?ｃｅｌｉｓ?ａｎｄ??巧ｂｒｏｂｌａｓｔｓ?ａｆｔｅｒ?ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｂｙ?ｔｒｙｐｓｉｎ（ｌＯＯｘ）；?Ｈ．?Ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉ化ｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ，?３ｒｄ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（２０〇ｘ）；?Ｉ．?Ｃｏｂｂｌｅｓ化ｎｅ?ｍａｍｍａｒｙ??ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ，?３ｒｄ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（?１００?Ｘ）；?Ｊ－Ｋ．?Ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｋｈｄｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ｆｏｒ?ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ?ｍｉｌｋ?（１０〇ｘ）；??２．２奶牛乳腺上皮細(xì)胞生物學(xué)性狀的檢測(cè)??２．２．１奶牛乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線??由圖２可見，Ｗ培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，３孔細(xì)胞４９２?ｎｍ處吸光值的平均值為??縱坐標(biāo)，繪制奶牛韓腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示：乳腺上皮細(xì)胞生??長(zhǎng)延遲期為０－２?ｄ

圖２－１奶牛乳腺上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察??Ｆｉｇ．２－１?ｄａｉｒｙ?ｃｏｗ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ??Ａ－Ｄ．培養(yǎng)口ｄ的原代細(xì)胞ＯＯＯＯ：?Ｅ－任原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)膜蛋白酶純化后，上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞分界（ｌＯＯｘ）?Ｈ．第３代，鋪路??石狀乳腺上皮細(xì)胞（２０００；?Ｉ．第３代，鋪路石狀乳腺上皮細(xì)施（ｌＯＯｘ）；?Ｊ－Ｋ．第３代，分泌乳滴的乳腺上皮細(xì)胞ＵＯＯｘ）；??Ａ－Ｂ．?Ｐｒｉｍａｒｙ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉ化ｅｌｉａ］?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｃｕｌｔｕｃｄ?ｆｏｒ?１２?ｄａｙｓ（?１００?巳－Ｇ．?Ｔｈｅ?ｃｌｅａｒ?ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｅｐｉ化ｄｉａｌ?ｃｅｌｉｓ?ａｎｄ??巧ｂｒｏｂｌａｓｔｓ?ａｆｔｅｒ?ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｂｙ?ｔｒｙｐｓｉｎ（ｌＯＯｘ）；?Ｈ．?Ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ?ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｉ化ｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ，?３ｒｄ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（２０〇ｘ）；?Ｉ．?Ｃｏｂｂｌｅｓ化ｎｅ?ｍａｍｍａｒｙ??ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ，?３ｒｄ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（?１００?Ｘ）；?Ｊ－Ｋ．?Ｍａｍｍａｒｙ?ｅｐｋｈｄｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ｆｏｒ?ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ?ｍｉｌｋ?（１０〇ｘ）；??２．２奶牛乳腺上皮細(xì)胞生物學(xué)性狀的檢測(cè)??２．２．１奶牛乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線??由圖２可見，Ｗ培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，３孔細(xì)胞４９２?ｎｍ處吸光值的平均值為??縱坐標(biāo)，繪制奶牛韓腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示：乳腺上皮細(xì)胞生??長(zhǎng)延遲期為０－２?ｄ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3512026