鴨圓環(huán)病毒（Duck circovirus, DuCV）主要是侵害宿主的免疫系統(tǒng),而導(dǎo)致宿主免疫力低下,進(jìn)而引發(fā)二重或多重感染,可給養(yǎng)殖業(yè)造成極大經(jīng)濟損失。然而由于DuCV發(fā)現(xiàn)較晚,又缺乏體外培養(yǎng)DuCV的方法,因此對其致病機理及危害的研究尚存在很多困難。為了解DuCV在廣西鴨群中流行和變異,以及危害程度,明確廣西DuCV的基因型及優(yōu)勢基因型,并為創(chuàng)建研制DuCV抗體快速檢測方法奠定基礎(chǔ)。本研究擬從廣西DuCV遺傳變異分析及Cap蛋白的原核表達(dá)兩個部分對廣西DuCV進(jìn)行研究和分析。1、廣西DuCV遺傳變異分析本研究采取PCR擴增方法對2010～2012年間廣西9市鴨群中2569份內(nèi)臟組織樣品進(jìn)行了檢測,檢測出陽性樣品194份,陽性率為7.55%。其中,篩選部分陽性樣品進(jìn)行基因組擴增和比對分析,共獲得14個DuCV全基因組序列�；蚪M大小為1993nt～1995nt,與已報道的其他DuCV毒株基因組大小一致。14個DuCV廣西毒株彼此之間的同源性為93.5%～99.8%,與德國、美國、韓國分離株以及24個中國大陸毒株的同源性為92.2%～99.6%,而與另外18個大陸地區(qū)毒株和4個臺灣毒... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 DuCV概述
    1.2 DuCV基因組結(jié)構(gòu)
    1.3 DuCV流行情況
    1.4 致病機理
    1.5 診斷方法
    1.6 防控措施
    1.7 研究目的及意義
    1.8 研究目標(biāo)
    1.9 研究方法及技術(shù)路線
第二章 廣西鴨群中鴨圓環(huán)病毒的遺傳變異分析
    2.1 材料
        2.1.1 組織樣品
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 樣品處理
        2.2.2 病毒DNA提取
        2.2.3 引物的設(shè)計與合成
        2.2.4 PCR檢測
        2.2.5 PCR產(chǎn)物凝膠電泳
        2.2.6 PCR產(chǎn)物回收
        2.2.7 DNA片段連接
        2.2.8 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 質(zhì)粒提取
        2.2.10 重組質(zhì)粒的鑒定
            2.2.10.1 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
            2.2.10.2 重組質(zhì)粒的PCR鑒定
            2.2.10.3 重組質(zhì)粒序列測定
        2.2.11 質(zhì)粒序列分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 PCR檢測結(jié)果
        2.3.2 基因序列分析
        2.3.3 基因組序列分析
            2.3.3.1 全基因組序列的分型
            2.3.3.2 ORF C1(Cap基因)序列的基因分型
            2.3.3.3 ORF V1(Rep基因)序列的基因分型
            2.3.3.4 ORF C2序列的基因分型
    2.4 討論
第三章 鴨圓環(huán)病毒Cap蛋白的原核表達(dá)
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 目的基因密碼子優(yōu)化
        3.2.2 目的基因片段的回收
        3.2.3 目的片段與表達(dá)載體pET-32a的連接
        3.2.4 連接物產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.2.5 重組質(zhì)粒pET-32a-Cap的提取
        3.2.6 重組質(zhì)粒的鑒定
        3.2.7 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        3.2.8 重組質(zhì)粒的序列測定
        3.2.9 Cap蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.10 陽性重組質(zhì)粒pET-32a-Cap的轉(zhuǎn)化
        3.2.11 誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
            3.2.11.1 最佳誘導(dǎo)表達(dá)時間的確定
            3.2.11.2 最佳表達(dá)IPTG濃度的確定
            3.2.11.3 最佳誘導(dǎo)表達(dá)溫度的確定
        3.2.12 表達(dá)形式的檢測
        3.2.13 Western blot鑒定
        3.2.14 重組蛋白的純化
    3.3 結(jié)果及分析
        3.3.1 重組質(zhì)粒pET-32a-Cap鑒定結(jié)果
        3.3.2 Cap蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)條件篩選結(jié)果
            3.3.2.1 陽性樣品電泳結(jié)果
            3.3.2.2 最佳表達(dá)時間的確定
            3.3.2.3 最佳表達(dá)IPTG濃度的確定
            3.3.2.4 最佳誘導(dǎo)表達(dá)溫度的確定
            3.3.2.5 表達(dá)形式的檢測
            3.3.2.6 Western blot鑒定
            3.3.2.7 蛋白純化結(jié)果
    3.4 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄1
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山東部分地區(qū)肉鴨群鴨圓環(huán)病毒血清學(xué)調(diào)查[J]. 王鑫,相琪旺,朱巖麗,謝之景,陳君豪,周國梅,成巖,姜世金.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2012(07)
[2]鴨圓環(huán)病毒Cap基因在昆蟲細(xì)胞桿狀病毒系統(tǒng)中的表達(dá)及鑒定[J]. 張興曉,鄒金峰,相琪旺,王鑫,陳琳,謝之景,姜世金.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2012(03)
[3]鴨圓環(huán)病毒LAMP可視化檢測方法的建立[J]. 趙光遠(yuǎn),謝芝勛,謝麗基,龐耀珊,鄧顯文,劉加波,范晴.  中國動物檢疫. 2012(03)
[4]鴨圓環(huán)病毒抗體的間接ELISA檢測方法的建立[J]. 蘇小東,曹瑞兵,張羽,劉文娟,陳昊,祝長青,陳溥言.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2011(05)
[5]廣西部分地區(qū)鴨圓環(huán)病毒感染情況調(diào)查[J]. 屈素潔,粟艷瓊,鄭敏,覃勇,莫勝蘭,陸文俊,梁媛,嚴(yán)斯剛.  中國畜牧獸醫(yī). 2010(11)
[6]鴨的免疫抑制病[J]. 黃瑜,祁保民,彭春香,施少華,萬春和,傅光華,程龍飛,林芳,林建生,陳紅梅.  中國獸醫(yī)雜志. 2010(07)
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[9]我國自然發(fā)病鴨群中鴨圓環(huán)病毒的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 劉少寧,張興曉,陳智,高繼明,魏秀麗,孔義波,朱巖麗,姜世金.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2009(11)
[10]鴨圓環(huán)病毒基因組序列分析及其C1截短基因的原核表達(dá)[J]. 施少華,陳珍,楊維星,傅光華,程龍飛,陳紅梅,彭春香,黃瑜.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2009(10)

碩士論文
[1]鴨圓環(huán)病毒廣西株的全基因序列分析及其分子生物學(xué)檢測方法的建立[D]. 趙光遠(yuǎn).廣西大學(xué) 2012
[2]鴨圓環(huán)病毒核酸探針檢測方法的建立及Cap蛋白核定位信號的研究[D]. 鄒金峰.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]鴨圓環(huán)病毒的流行病學(xué)調(diào)查[D]. 劉少寧.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3509820