通過對采集到的青島市某發(fā)病羊場羊口瘡病料（強毒）在山羊成纖維細胞上連續(xù)傳90代（弱毒）后,分別進行病毒基因組提取,并對提取到的基因組分別命名為ORFV-QD和ORFV-RD。根據(jù)GenBank上發(fā)表的ORFV全基因組序列設計并合成3對特異性引物,分別擴增ORFV-QD和ORFVRD的B2L基因、F1L基因和VIR基因片段,并將擴增得到的基因組片段分別克隆到pMD-19T載體上,轉化到DH5α感受態(tài)細胞中,對重組質(zhì)粒進行鑒定后送至測序公司進行測序,用DNASTAR軟件對測序結果進行拼接及3組基因之間核苷酸同源性比較分析,將測序結果與NCBI上已公布的13組ORFV全基因組相應基因核苷酸序列進行同源性比對分析、構建系統(tǒng)進化樹及氨基酸序列比對分析。結果表明,3組基因與參考序列的B2L基因、F1L基因和VIR基因核苷酸同源性分別為92.1%～98.4%、96.1%～99.1%和94.6%～100%。將2株病毒基因組與參考序列進行氨基酸序列比較分析,結果顯示2株病毒基因組之間并沒有較為明顯的差異。 

【文章來源】：畜牧與飼料科學. 2020,41(05)

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

B2L基因PCR擴增結果

用上述設計的F1L基因引物，采用PCR方法從ORFV-QD毒株中擴增出1條1 029 bp的目的條帶，從ORFV-RD毒株中擴增出1條1 012 bp的目的條帶，分別命名為ORFV-QD-F1L和OR-FV-RD-F1L。凝膠電泳結果如圖2所示。2.3 VIR基因的PCR擴增

在對基因片段的序列測序結果進行分析后，可知B2L基因大小為1 137 bp，可編碼379個氨基酸殘基。F1L基因大小為1 012 bp，可編碼338個氨基酸殘基。VIR基因大小為552 bp，可編碼184個氨基酸殘基。利用DNASTAR軟件對測序獲得的基因片段序列與Gen Bank中發(fā)布的13組ORFV序列（見表4）進行同源性比對分析。ORFV-QD-B2L與參考毒株同源性為93.9%～98.4%,ORFV-RD-B2L與參考毒株同源性為92.1%～96.6%（見圖7);ORFV-QD-F1L與參考毒株同源性為96.1%～99.1%,ORFV-RD-F1L與參考毒株同源性為96.3%～97.8%（見圖8);ORFV-QD-VIR與參考毒株同源性為94.6%～100%,ORFV-RD-VIR與參考毒株同源性則為94.4%～99.3%（見圖9）。圖5 F1L基因PCR鑒定結果

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3509420