本研究一方面對廣西龍勝鳳雞、三黃雞等地方品系雞的祖代、父母代種群進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,開展禽白血病凈化研究,將ELISA抗原檢測為陽性的個體雞的無菌血清感染成纖維細(xì)胞,提取前病毒DNA,進(jìn)行核酸擴增和測序。另一方面,將臨床上可引起急性纖維肉瘤的ALV-J的組織濾液以腹腔為接種部位感染裸鼠,并將發(fā)生急性纖維肉瘤的SPF雞的新鮮肉瘤組織細(xì)胞懸液以腋下為接種部位接種裸鼠,研究缺陷型ALV-J對裸鼠的感染性。通過禽白血病病毒的分離與鑒定,從地方品系龍勝鳳雞和土雞中各分離到1株B亞群ALV,從三黃雞中分離到8株J亞群ALV。序列分析結(jié)果顯示龍勝鳳雞分離株GX-J-15的gp85氨基酸序列與國際上僅發(fā)表的4株B亞群代表毒株的同源性在91.7%以上,其中與山東地方品系蘆花雞分離株SDAU09C2的同源性高達(dá)98.1%；土雞分離株GX-J-14的gp85氨基酸序列與5株B亞群代表株的同源性在89%-90%,遠(yuǎn)高于與其他亞群的同源性。而兩個分離株的gp85氨基酸序列與J亞群代表毒株的同源性僅為50%左右；從三黃雞中分離到的8株J亞群ALV,其gp85氨基酸序列與J亞群ALV參考株的gp85氨基酸序列同源性均... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 禽白血病病毒的特性
    1.1 禽白血病/肉瘤病毒群
        1.1.1 病毒粒子的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 病毒粒子的理化特性
        1.1.3 核酸和基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.4 蛋白結(jié)構(gòu)
        1.1.5 病毒的流行特點和傳播途徑
        1.1.6 ALV感染的檢測技術(shù)
            1.1.6.1 ALV血清學(xué)檢測方法
            1.1.6.2 ALV的分離與鑒定
            1.1.6.3 ALV核酸檢測技術(shù)
    1.2 裸鼠的生物學(xué)特性及應(yīng)用
    1.3 本課題的研究目的與意義
第二章 廣西地方品系雞ALV的分離鑒定及分子進(jìn)化分析
    摘要
    2.1 材料
        2.1.1 病料來源
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 細(xì)胞
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 引物
        2.1.6 分子生物學(xué)分析軟件
    2.2 方法
        2.2.1 成纖維細(xì)胞的制備
        2.2.2 病毒的分離
        2.2.3 細(xì)胞基因組DNA的抽提
        2.2.4 細(xì)胞基因組的PCR鑒定
        2.2.5 病毒env基因的克隆轉(zhuǎn)化與測序
            2.2.5.1 env基因的擴增
            2.2.5.2 PCR產(chǎn)物回收
            2.2.5.3 DNA的連接反應(yīng)
            2.2.5.4 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            2.2.5.5 陽性克隆序列測定
        2.2.6 氨基酸序列同源性分析
    2.3 實驗結(jié)果與分析
        2.3.1 細(xì)胞基因組的PCR鑒定結(jié)果
            2.3.1.1 龍勝鳳雞和土雞樣品鑒定結(jié)果
            2.3.1.2 三黃雞樣品鑒定結(jié)果
        2.3.2 病毒env基因的擴增
            2.3.2.1 ALV-B env基因的擴增
            2.3.2.2 ALV-J env基因的擴增
        2.3.3 ALV-B分離株序列同源性分析
            2.3.3.1 gp85基因編碼的氨基酸序列同源性分析
            2.3.3.2 gp37基因編碼的氨基酸序列同源性分析
            2.3.3.3 3’末端非編碼區(qū)序列同源性分析
        2.3.4 ALV-J分離株序列同源性分析
            2.3.4.1 gp85基因編碼的氨基酸序列同源性分析
            2.3.4.2 gp37基因編碼的氨基酸序列同源性分析
            2.3.4.3 3’末端非編碼區(qū)序列同源性分析
    2.4 小結(jié)與討論
        2.4.1 十個分離毒株的亞群分類
        2.4.2 兩個B亞群分離株的gp85變異
        2.4.3 八個J亞群分離株的gp85變異
第三章 致急性纖維肉瘤的缺陷型ALV-J對裸鼠的感染性實驗
    摘要
    3.1 材料
        3.1.1 病料來源
        3.1.2 實驗動物
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 引物
    3.2 方法
        3.2.1 肉瘤組織研磨濾液對裸鼠的感染
        3.2.2 肉瘤組織研磨濾液對SPF雛雞的感染
        3.2.3 肉瘤組織細(xì)胞懸液對裸鼠的接種
        3.2.4 剖解及病理組織切片觀察
        3.2.5 復(fù)制完整型病毒與缺陷型病毒前病毒基因組序列的擴增
            3.2.5.1 前病毒DNA的提取
            3.2.5.2 病毒RNA的提取
            3.2.5.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)
            3.2.5.4 RT-PCR
    3.3 實驗結(jié)果與分析
        3.3.1 肉瘤組織研磨濾液對SPF雛雞的感染
        3.3.2 裸鼠肉眼病變
        3.3.3 病理組織切片觀察
        3.3.4 復(fù)制完整型病毒與缺陷型病毒前病毒基因組序列的擴增
            3.3.4.1 SD1005前病毒cDNA的核酸擴增
            3.3.4.2 攜帶有腫瘤基因的病毒嵌合體分子核酸片段的擴增
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加的科研項目



本文編號：3509002