豬血凝性腦脊髓炎（porcine hemagglutinating encephalomyelitis,PHE）是由豬血凝性腦脊髓炎病毒（porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV）引起的急性、高度接觸性傳染病,給我國(guó)各地養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重威脅。PHEV主要侵害宿主中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的神經(jīng)細(xì)胞,導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。通常情況下,病毒入侵細(xì)胞時(shí)會(huì)引起細(xì)胞的免疫應(yīng)答反應(yīng)進(jìn)而清除病原體以維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。自噬正是一種細(xì)胞固有的免疫機(jī)制,通過(guò)將包含病原體的內(nèi)含物運(yùn)送至溶酶體進(jìn)行降解,進(jìn)而阻止病原體在胞內(nèi)復(fù)制增殖。然而,人們發(fā)現(xiàn),病毒也能夠進(jìn)化出一些調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)抗細(xì)胞自噬,并為自身復(fù)制提供有利條件。最新研究表明,PHEV能夠誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生不完全自噬進(jìn)而為自身生存提供便利。木瓜樣蛋白酶（Papain-like protease,PLP）是多種病毒復(fù)制過(guò)程中重要的蛋白酶,有研究表明:SARS、PEDV、HCoV和MERS等冠狀病毒均可以通過(guò)PLP調(diào)控自噬體的形成,引起宿主細(xì)胞發(fā)生不完全自噬并負(fù)向調(diào)控抗病毒免疫反應(yīng)。PHEV同屬于冠狀病... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

冠狀病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白示意圖

圖 1.2 PLP 轉(zhuǎn)染引起自噬相關(guān)蛋白 LC3 的變化Fig.1.2 The changes of autophagy-associated protein LC3A .Western blot 檢測(cè)結(jié)果；B.光密度分析變化趨勢(shì)1.2.3 N2a 細(xì)胞中過(guò)表達(dá) PLP 后誘導(dǎo) GFP-LC3B 綠色熒光斑點(diǎn)的形成將 pCMV-Flag-PLP 與 GFP-LC3B 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至 N2a 細(xì)胞中，用 Rapamycin處理細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照組。到達(dá)時(shí)間點(diǎn)后收取樣品并進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)分析，觀察綠色熒光蛋白在細(xì)胞中呈現(xiàn)的具體分布狀態(tài)。結(jié)果表明，過(guò)表達(dá) PLP 蛋白后，N2a 細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)明顯的綠色熒光點(diǎn)狀聚集（如圖 1.3），與 Rapamycin 處理的結(jié)果類似，而轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞中 GFP-LC3 呈現(xiàn)明顯的彌散狀分布，進(jìn)一步驗(yàn)證了 PLP 能夠誘導(dǎo) N2a 細(xì)胞發(fā)生自噬。

圖 1.2 PLP 轉(zhuǎn)染引起自噬相關(guān)蛋白 LC3 的變化Fig.1.2 The changes of autophagy-associated protein LC3A .Western blot 檢測(cè)結(jié)果；B.光密度分析變化趨勢(shì)N2a 細(xì)胞中過(guò)表達(dá) PLP 后誘導(dǎo) GFP-LC3B 綠色熒光斑點(diǎn)的形成pCMV-Flag-PLP 與 GFP-LC3B 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至 N2a 細(xì)胞中，用 R胞作為陽(yáng)性對(duì)照組。到達(dá)時(shí)間點(diǎn)后收取樣品并進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)熒光蛋白在細(xì)胞中呈現(xiàn)的具體分布狀態(tài)。結(jié)果表明，過(guò)表達(dá) PLP胞內(nèi)出現(xiàn)明顯的綠色熒光點(diǎn)狀聚集（如圖 1.3），與 Rapamycin 處，而轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞中 GFP-LC3 呈現(xiàn)明顯的彌散狀分布，進(jìn)一 能夠誘導(dǎo) N2a 細(xì)胞發(fā)生自噬。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]豬血凝性腦脊髓炎的研究現(xiàn)狀[J]. 耿百成,高豐,賀文琦.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2005(06)
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