為了獲得高效表達(dá)純化并且抗原性較好的牛妊娠相關(guān)糖蛋白2（bovine pregnancy-associated glycoprotein 2,BoPAG2）,對該蛋白的結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測分析。通過PCR擴(kuò)增荷斯坦奶牛BoPAG2基因,并將該基因連接至表達(dá)載體pET-28a,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌（BL21）中誘導(dǎo)表達(dá)并純化,通過SDS-PAGE和Western blotting驗(yàn)證與檢測該蛋白的大小和免疫學(xué)特性,通過生物信息學(xué)對BoPAG2蛋白的糖基化修飾、B細(xì)胞抗原表位、親水性、信號肽,蛋白二級結(jié)構(gòu)和3D模型、保守結(jié)構(gòu)域以及蛋白互作進(jìn)行預(yù)測分析。結(jié)果表明,本研究成功克隆出BoPAG2基因,通過誘導(dǎo)表達(dá)并純化相應(yīng)蛋白,通過SDS-PAGE和Western blotting驗(yàn)證BoPAG2蛋白的大小與預(yù)期結(jié)果相符,通過生物信息學(xué)預(yù)測分析結(jié)果顯示,BoPAG2蛋白有5個位點(diǎn)發(fā)生糖基化修飾,分別為Asp⁵¹、Asp⁷¹、Asp¹¹⁴、Asp²⁵²和Asp³⁴³,該蛋白含有15個B細(xì)... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(10)北大核心

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【部分圖文】：

BoPAG2基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

BoPAG2-pET28a重組質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切后經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,得到大小為1 131 bp的目的條帶(圖2),與預(yù)期結(jié)果相符,表明BoPAG2基因已成功插入表達(dá)載體中。2.3 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化

通過NetNGIyc 1.0 Server在線軟件對蛋白進(jìn)行糖基化修飾位點(diǎn)預(yù)測,預(yù)測結(jié)果如圖5所示,BoPAG2在Asp51、Asp71、Asp114、Asp252、Asp343 5個位點(diǎn)發(fā)生N-糖基化修飾。使用IEDB在線軟件預(yù)測分析蛋白線性B細(xì)胞抗原表位(圖6)和抗原表位序列(表1)結(jié)果顯示,BoPAG2有17個B細(xì)胞抗原表位。通過ProtScale軟件對BoPAG2蛋白進(jìn)行親水性分析,結(jié)果顯示,第8位谷氨酸疏水性最強(qiáng)(最高分值為3.2),第50賴氨酸位親水性最強(qiáng)(最低分值為-2.044)(圖7)。通過SignalP 4.1 Server軟件預(yù)測蛋白信號肽如(圖8)所示,BoPAG2在N端前15個氨基酸序列為信號肽序列。通過SOPMA在線軟件預(yù)測蛋白的二級結(jié)構(gòu),結(jié)果顯示,BoPAG2蛋白主要以無規(guī)則卷曲、α-螺旋、延伸鏈和β折疊組成,所占比例分別為41.76%、19.41%、32.98%和5.85%(圖9)。圖4 BoPAG2蛋白Western blotting結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]牛IFNτ基因成熟蛋白CDS區(qū)的克隆、原核表達(dá)及其在妊娠建立過程中的生物學(xué)功能研究[D]. 張明.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3507859