豬流行性腹瀉病毒的分離鑒定及其基因組測序分析
發(fā)布時間：2021-11-20 00:59
豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是有囊膜的單鏈正向RNA病毒,是一種急性高度傳染性腸道疾病的病原體,導致哺乳仔豬死亡率很高。PEDV在小腸上皮細胞復制導致絨毛萎縮,吸收不良和嚴重腹瀉。PEDV侵染宿主細胞是由病毒纖突糖蛋白（S）介導的,病毒附著于靶細胞并進行膜融合而進入細胞。PEDV體外增殖需要胰蛋白酶的存在,胰蛋白酶水解蛋白活性導致S蛋白切割成S1和S2亞基,使病毒與細胞間的融合增強,并增加病毒的感染力,在感染的細胞中復制進而釋放。在本項研究中,病料采集于中國黑龍江省哈爾濱市某豬場疑似感染PEDV病例。將小腸樣品制作病理組織切片,觀察到腸絨毛萎縮,上皮細胞空泡變性,固有層充血和炎性細胞浸潤。RT-PCR鑒定確定沒有混入輪狀病毒和豬傳染性胃腸炎病毒感染后,對小腸樣品進行無菌處理并在豬小腸上皮細胞（Porcine small intestinal epithelial cell,IPEC-J2）上進行盲傳培養(yǎng),IPEC-J2細胞是從新生仔豬中段空腸內(nèi)分離得到未分化的柱狀上皮細胞,更好的模擬腸道環(huán)境,當傳至第5代時出現(xiàn)典型細胞病變...
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：59 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
HE染色的小腸組織切片
2 000 DNA 分子量標準；1：水對照；2：PEDV PCM: DL2 000; 1: H2O Control; 2: PCR products of PED圖 3-4 細胞上清液 RT-PCR 的電泳結(jié)果4 Cellular supernatant electrophoresis results b
圖 3-7 HLJ 分離株在 IPEC-J2 細胞上的生長曲線Fig. 3-7 The growth curve of HLJ strain in IPEC-J2 ceJ 株全基因組 RT-PCR 分段擴增基因組 5’端利用 5’RACE 試劑盒對基因組的末端片段進
【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬流行性腹瀉病毒流行毒株的分離與鑒定[J]. 周書亭,謝洋洋,丁思嘉,鄭煜名,蔡雨豪,羅依然,袁聰俐,楊志彪. 中國獸醫(yī)科學. 2017(08)
[2]豬流行性腹瀉病毒陜西HZ株的分離與鑒定[J]. 龐文靜,付明哲,許信剛,郭抗抗,張琪. 動物醫(yī)學進展. 2017(07)
[3]2011—2015年我國南方地區(qū)PEDV分子流行病學調(diào)查及S基因遺傳變異分析[J]. 李智麗,黃淑堅,馬靜云,畢英佐. 廣東農(nóng)業(yè)科學. 2016(11)
[4]豬流行性腹瀉的實驗室診斷方法與疫苗研究進展[J]. 馬子貴,鮑玉芳,何召慶. 獸醫(yī)導刊. 2015(13)
[5]豬流行性腹瀉病毒的分離與鑒定[J]. 李亞龍,黃巖,吳艷麗,李靜姬. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2015(09)
[6]雙抗體夾心ELISA檢測排泄物PEDV[J]. 李一經(jīng),劉博,姜艷平,崔文,唐麗杰,喬薪瑗,劉敏. 東北農(nóng)業(yè)大學學報. 2015(02)
[7]PEDV、TGEV、RV多重RT-PCR檢測方法的建立與應用[J]. 徐引弟,張青嫻,李建林,張彬,王克領,朱文豪. 中國獸藥雜志. 2014(11)
[8]豬流行性腹瀉病毒S基因研究進展[J]. 陳弟詩,任玉鵬,張斌,李麗,聶艷如,周莉媛. 動物醫(yī)學進展. 2014(07)
[9]豬流行性腹瀉病毒野毒株/疫苗株RT-PCR鑒別診斷方法的建立[J]. 李長龍,陳建飛,張鑫,時洪艷,馮力. 中國獸醫(yī)雜志. 2014(06)
[10]豬流行性腹瀉的病毒分離鑒定與免疫試驗[J]. 王林鋒,劉寶元,郝常寶. 科學種養(yǎng). 2014(06)
博士論文
[1]河南省豬流行性腹瀉病毒遺傳進化分析及免疫學檢測方法的建立[D]. 李任峰.西北農(nóng)林科技大學 2016
[2]豬流行性腹瀉病毒感染豬小腸上皮細胞抑制IFN-β產(chǎn)生及激活NF-κB機理研究[D]. 曹麗艷.東北農(nóng)業(yè)大學 2015
[3]豬流行性腹瀉病毒AJ1102株的分離、鑒定及其分子進化特征[D]. 畢靜.華中農(nóng)業(yè)大學 2013
碩士論文
[1]基于假病毒的豬流行性腹瀉病毒S1蛋白細胞定位研究[D]. 叢郢穎.東北農(nóng)業(yè)大學 2014
[2]豬流行性腹瀉病毒NJ株的分離與鑒定[D]. 施雯.東北農(nóng)業(yè)大學 2014
[3]豬流行性腹瀉病毒特性研究及其種毒制備[D]. 王靚靚.東北農(nóng)業(yè)大學 2013
[4]豬流行性腹瀉病毒S1蛋白親和肽的篩選與鑒定[D]. 楊巍.東北農(nóng)業(yè)大學 2011
[5]豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.東北農(nóng)業(yè)大學 2011
本文編號：3506246
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：59 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
HE染色的小腸組織切片
2 000 DNA 分子量標準；1：水對照；2：PEDV PCM: DL2 000; 1: H2O Control; 2: PCR products of PED圖 3-4 細胞上清液 RT-PCR 的電泳結(jié)果4 Cellular supernatant electrophoresis results b
圖 3-7 HLJ 分離株在 IPEC-J2 細胞上的生長曲線Fig. 3-7 The growth curve of HLJ strain in IPEC-J2 ceJ 株全基因組 RT-PCR 分段擴增基因組 5’端利用 5’RACE 試劑盒對基因組的末端片段進
【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬流行性腹瀉病毒流行毒株的分離與鑒定[J]. 周書亭,謝洋洋,丁思嘉,鄭煜名,蔡雨豪,羅依然,袁聰俐,楊志彪. 中國獸醫(yī)科學. 2017(08)
[2]豬流行性腹瀉病毒陜西HZ株的分離與鑒定[J]. 龐文靜,付明哲,許信剛,郭抗抗,張琪. 動物醫(yī)學進展. 2017(07)
[3]2011—2015年我國南方地區(qū)PEDV分子流行病學調(diào)查及S基因遺傳變異分析[J]. 李智麗,黃淑堅,馬靜云,畢英佐. 廣東農(nóng)業(yè)科學. 2016(11)
[4]豬流行性腹瀉的實驗室診斷方法與疫苗研究進展[J]. 馬子貴,鮑玉芳,何召慶. 獸醫(yī)導刊. 2015(13)
[5]豬流行性腹瀉病毒的分離與鑒定[J]. 李亞龍,黃巖,吳艷麗,李靜姬. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2015(09)
[6]雙抗體夾心ELISA檢測排泄物PEDV[J]. 李一經(jīng),劉博,姜艷平,崔文,唐麗杰,喬薪瑗,劉敏. 東北農(nóng)業(yè)大學學報. 2015(02)
[7]PEDV、TGEV、RV多重RT-PCR檢測方法的建立與應用[J]. 徐引弟,張青嫻,李建林,張彬,王克領,朱文豪. 中國獸藥雜志. 2014(11)
[8]豬流行性腹瀉病毒S基因研究進展[J]. 陳弟詩,任玉鵬,張斌,李麗,聶艷如,周莉媛. 動物醫(yī)學進展. 2014(07)
[9]豬流行性腹瀉病毒野毒株/疫苗株RT-PCR鑒別診斷方法的建立[J]. 李長龍,陳建飛,張鑫,時洪艷,馮力. 中國獸醫(yī)雜志. 2014(06)
[10]豬流行性腹瀉的病毒分離鑒定與免疫試驗[J]. 王林鋒,劉寶元,郝常寶. 科學種養(yǎng). 2014(06)
博士論文
[1]河南省豬流行性腹瀉病毒遺傳進化分析及免疫學檢測方法的建立[D]. 李任峰.西北農(nóng)林科技大學 2016
[2]豬流行性腹瀉病毒感染豬小腸上皮細胞抑制IFN-β產(chǎn)生及激活NF-κB機理研究[D]. 曹麗艷.東北農(nóng)業(yè)大學 2015
[3]豬流行性腹瀉病毒AJ1102株的分離、鑒定及其分子進化特征[D]. 畢靜.華中農(nóng)業(yè)大學 2013
碩士論文
[1]基于假病毒的豬流行性腹瀉病毒S1蛋白細胞定位研究[D]. 叢郢穎.東北農(nóng)業(yè)大學 2014
[2]豬流行性腹瀉病毒NJ株的分離與鑒定[D]. 施雯.東北農(nóng)業(yè)大學 2014
[3]豬流行性腹瀉病毒特性研究及其種毒制備[D]. 王靚靚.東北農(nóng)業(yè)大學 2013
[4]豬流行性腹瀉病毒S1蛋白親和肽的篩選與鑒定[D]. 楊巍.東北農(nóng)業(yè)大學 2011
[5]豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.東北農(nóng)業(yè)大學 2011
本文編號：3506246
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