雞鼻炎是由副雞禽桿菌引起的以雞腫頭腫臉為主要癥狀的急性呼吸道傳染病，主要引起育成雞生長發(fā)育受阻和淘汰率增加，且造成蛋雞產(chǎn)蛋量明顯下降，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大損失。因此，進(jìn)行Apg新型疫苗的研發(fā)，研制出對(duì)雞安全、有效并能迅速產(chǎn)生免疫力的基因工程疫苗為當(dāng)前研究的主要任務(wù)。本研究對(duì)B型標(biāo)準(zhǔn)株gcbG基因進(jìn)行了克隆、測(cè)序，大小為495bp，將其插入pGEX-5X-1原核表達(dá)質(zhì)粒中，構(gòu)建pGEX-5X-gcbG原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，獲得gcbG蛋白原核表達(dá)菌株；對(duì)gcbG蛋白進(jìn)行表達(dá)、最佳表達(dá)條件的優(yōu)化以及表達(dá)產(chǎn)物的免疫原性分析，結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)成功地在體外表達(dá)了APg血清B型gcbG蛋白，大小約為44ku,該蛋白在IPTG濃度為1mM/L，溫度為28℃，表達(dá)時(shí)間為5h，表達(dá)量最高，且為包涵體表達(dá)。純化gcbG重組蛋白包涵體，進(jìn)行Westernblotting檢測(cè)，結(jié)果表明，目的蛋白與Apg雞陽性血清有特異性免疫反應(yīng)。對(duì)B型標(biāo)準(zhǔn)株HctC基因進(jìn)行了克隆、測(cè)序，大小為1164bp，以副雞禽桿菌標(biāo)準(zhǔn)株0221為實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，利用轉(zhuǎn)座子采用定點(diǎn)克隆的方法，擴(kuò)增其全長片段，... 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

gcbG基因的PCR擴(kuò)增250bp

重組質(zhì)粒pGEX-5X-gcbG的酶切鑒定495bp

SDS-PAG鑒定檢測(cè)gcbG蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)Fig.2-4SDS－PAGEanalysisofproteinexpressedbyProkaryoticexpressioninE.coli

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]副雞禽桿菌體內(nèi)誘導(dǎo)基因的篩選研究[D]. 梁玉榮.河北工程大學(xué) 2012
[2]副豬嗜血桿菌hhdA基因缺失株的構(gòu)建及胞外絲氨酸蛋白酶免疫原性的研究[D]. 張念章.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
[3]副豬嗜血桿菌aroA基因鑒定分析及其轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建研究[D]. 薛曉晶.首都師范大學(xué) 2008
[4]延邊地區(qū)雞傳染鼻炎油乳苗的研制[D]. 吳繼秋.延邊大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3504489