提取柔嫩艾美耳球蟲（揚州株）配子體基因組DNA,PCR擴增配子體基因Etgam56,經(jīng)克隆和序列分析后,優(yōu)化密碼子,連接至pET-28a（+）,構(gòu)建原核表達載體pET-28a（+）-Etgam56,優(yōu)化條件進行體外誘導(dǎo)表達,Western blot分析其抗原性。結(jié)果顯示,Etgam56基因全長1 425 bp,為一個完整開放閱讀框,共編碼474個氨基酸;體外表達重組蛋白的大小約為56 ku,IPTG終濃度為0.10 mmol/L,37℃誘導(dǎo)3 h時的表達量最高,且主要以包涵體形式存在。Western blot結(jié)果顯示,該重組蛋白能被6×HIS標(biāo)簽單克隆抗體、柔嫩艾美耳球蟲雞康復(fù)血清和毒害艾美耳球蟲雞康復(fù)血清識別,表明該重組蛋白為特異性表達的蛋白,具有很好的抗原性和交叉反應(yīng)性。本研究將為進一步探析柔嫩艾美耳球蟲配子體蛋白的功能與研制雞球蟲基因工程疫苗奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

Etgam 56的PCR擴增

重組質(zhì)粒的酶切鑒定

在最適表達條件下,大量誘導(dǎo)表達重組蛋白,經(jīng)HIS標(biāo)簽Ni-NTA親和層析柱純化,收集純化過程中不同時期流出液進行12% SDS-PAGE,結(jié)果顯示,裂解液中的蛋白能與Ni-NTA較好結(jié)合,經(jīng)3次Washing Buffer洗滌,可有效去除未與Ni-NTA結(jié)合的雜蛋白,Elution Buffer可以有效洗脫目的蛋白,純化效果較好,且復(fù)性過程中未發(fā)生蛋白降解(圖3)。2.6 重組蛋白的鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]雞堆型艾美耳球蟲gam56基因的克隆及其表達產(chǎn)物的免疫原性分析[J]. 華恩玉,朱玉,汪飛燕,孔令明,劉丹丹,候照峰,許金俊,陶建平.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2019(12)
[2]毒害艾美耳球蟲配子體Engam59基因的克隆表達及其表達產(chǎn)物的免疫原性分析[J]. 劉丹丹,曹李琴,朱玉蘭,許金俊,陶建平.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2017(12)



本文編號：3504190